HE染色常見問題:切片染色不均勻,,有片狀的弱著**存在答:(1)取材時組織太厚,固定過久,,導致深部組織固定不佳,,而表淺組織過度固定,而透明,、脫水,、浸蠟均是如此,這樣在后期染色時就會出現(xiàn)染色不均勻,。應該將厚的組織剖開固定,。(2)制片過程有問題,切片厚薄不一,,或者有刀痕,,或組織與玻片間存在氣泡。同一張切片厚薄不一,,一般都是在制片時,,刀片固定不佳或刀片鈍或刀片與組織角度不佳(一般比較好角度為5°)(3)脫蠟前未烘烤,,脫蠟時間過短或脫蠟液使用過久,,導致脫蠟不徹底。(4)染色液過少,,著色不均勻,;或染色時部分組織干涸而另一部分濕潤,,這樣會導致組織吸附染料的能力不一,。(5)分化不當,。南京英瀚斯,,專業(yè)的病理染色實驗服務平臺。讓您放心的實驗外包公司,,專業(yè)HE染色實驗服務平臺,。湖北比較好的HE染色價格
HE染色觀察肝臟HE染色切片,首先要在顯微鏡下找到肝臟的標志性結構——肝小葉,。顯微鏡首先調4倍物鏡,,調準焦螺旋至視野清晰,可以看到肝小葉結構,。人的肝小葉之間結締組織少,,小葉分隔不明顯,但動物如豬或小鼠,,其肝小葉分界非常明顯,。肝小葉**有**靜脈,在橫切片上顯示為空洞,。肝小葉之間為將物鏡調制10倍或20倍,,就可以清楚地看到肝小葉結構。肝細胞以**靜脈為中心向周圍放射狀排列,,稱為肝板,。一般在20倍物鏡下可以清晰看到肝細胞。20倍物鏡下,,肝細胞內染色為藍色的是細胞核,,細胞核大而圓,居中,,異染色質少而著色淺,,能清晰看到核仁。肝細胞胞質豐富,,多成嗜酸性,,當?shù)鞍踪|合成旺盛時,胞質內出現(xiàn)散在的嗜堿性物質,。肝細胞內有豐富的細胞器比如溶酶體,、高爾基體、內質網(wǎng),,等等,,但是在光鏡下是無法看到的,需要在電鏡下才能觀察到,。當然,,肝小葉內除了肝細胞,還有膽小管,、肝血竇,、肝巨噬細胞等組織形態(tài),,但是在HE染色時并不容易觀察到。做肝臟HE染色切片主要目的一般都是為了觀察肝細胞形態(tài)是否完整,、胞核有無增大,、肝小葉形態(tài)是否完整,以檢測藥物等刺激因素對肝臟的損傷作用,。天津專業(yè)的HE染色價格肺部組織HE染色如何觀察,。
HE染色全名為蘇木精和伊紅染色方法,是**基本的病理學染色技術,。由于組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣,。經(jīng)蘇木精染色后,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍,,如處理適宜,可使細胞核著清楚的深藍色,,胞漿等其它成分脫色,。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色,。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態(tài)結構特點均可顯示出來,。質量好的HE具備條件1.細胞核與細胞漿藍紅相映,鮮艷亮麗,;2.胞核鮮明,、核膜、核染色質顆粒均清晰可見,;3.組織或一般結構特點及假物質成分均能顯示出來,。
HE染色石蠟和冰凍切片樣本的處理,樣品處理:a.對于石蠟切片:二甲苯中脫蠟5-10分鐘;換用新鮮的二甲苯,,再脫蠟5-10分鐘;無水乙醇5分鐘;90%乙醇2分;70%乙醇2分鐘;蒸餾水2分鐘.b.對于冰凍切片:蒸餾水2分鐘,。c對于培養(yǎng)細胞:用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。蒸餾水洗滌2分鐘,。換用新鮮的蒸餾水,,再洗滌2分鐘。蘇木素伊紅(HE)染色對于上述處理好的樣品:蘇木素染色液染色5-10分鐘(可以根據(jù)染色結果和要求調整時間),。浸自來水中沖洗去多余的染色液,,約10分鐘。蒸餾水再洗滌一遍(數(shù)秒鐘),。95%乙醇5秒,。伊紅染色液染色30秒-2分鐘(可以根據(jù)染色結果和要求調整時間),。此時,,如果需要直接觀察,,可以用70%乙醇洗滌2次。如需脫水,、透明后封片按后續(xù)步驟進行,,70%乙醇洗滌后仍可按照后續(xù)步驟進行脫水、透明和封片處理,。HE染色原理 試劑 染色步驟 注意事項 ,。
HE染色構成組織內蛋白質的氨基酸的種類很多,它們有不同的等電點,。在普通染色法中,,染色液的酸堿度為pH6左右,細胞內的酸性物質如細胞核的染色質,、腺細胞和神經(jīng)細胞內的粗面內質網(wǎng)及透明軟骨基質等均被堿性染料染色,,這些物質稱為嗜堿性。而細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白,、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,,這些物質稱為嗜酸型。如果改變染色液的酸堿度,,pH值升高時,,則原來被酸性染料染色的物質可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時,,原來被堿性染料染色的物質則可變?yōu)槭人嵝?。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應。石蠟組織切片的HE染色,。安徽推薦的HE染色分析
HE染色的實驗目的以及實驗結果分析,。湖北比較好的HE染色價格
HE染色全名蘇木精—伊紅染色法,屬于化學染色法,,其主要依靠蘇木精染液為堿性,,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色;伊紅為酸性染料,,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色,。實驗過程:1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,,自來水洗,。2、蘇木素染色:切片入蘇木素染液染3-5min,,自來水洗,,分化液分化,自來水洗,返藍液返藍,,流水沖洗,。3、伊紅染色:切片依次入85%,、95%的梯度酒精脫水各5min,,入伊紅染液中染色5min。4,、脫水封片:切片依次放入無水乙醇I5min-無水乙醇II5min-無水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,,中性樹膠封片。5,、顯微鏡鏡檢,,圖像采集分析。結果判讀:細胞核呈藍色,,細胞質呈紅色湖北比較好的HE染色價格