免疫組化結果要如何分析,？

 （1）陽性著色細胞計數法,。在40*光鏡下,，隨機選擇不重疊的10個視野,，機器或人工計數陽性著色細胞,，每組3~6張不同動物組織切片,，然后進行組間比較即可,。

（2）灰密度分析法,?？梢酝ㄟ^在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區(qū)域,、相同條件下用image j進行灰密度分析，然后進行統(tǒng)計分析即可,。

（3）評分法,。用光學顯微鏡下對組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色,、淺褐色,、深褐色）,、陽性范圍進行評分（1~4分為0~25%、26~50%,、51~75%,、76~100%），**終可以分數相加,，再進行比較,。對于以上這幾種方法，各有利弊,，請細心選擇,。要想得到正確結果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質量切片,。

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免疫組化的局限性，可能會有假陽性,。陽性信號定位不正確即為假陽性,，包括著色不勻、背景著色,、邊緣效應,，另外組織的某些特定成分也能導致假陽性結果。假陽性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷?，抗體有一個合適的濃度范圍且必須在有效期內使用,，過期的抗體或者不著色，或者背景著色,，形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織,，組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時間過長，由于室溫的影響夏季孵育時間稍短,，冬季孵育時間稍長;(4)操作過程中組織變干,，造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影，產生假陽性;(5)3,，3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時間太長,，DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用，配制時間比較好在30min以內;(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質，因此間質和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色,，如內源性酶血紅蛋白,、肌紅蛋白等造成的著色，可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細胞,、淋巴細胞也會產生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中,，使壞死組織呈較高的背景染色，在免疫組化中應避免選擇壞死組織較多的蠟塊,。河北小鼠免疫組化實驗免疫組化流程是什么樣的,？

在臨床應用中，免疫組化還可以進一步分類不同qi官與組織交界處cancer,。由于重疊的特征,，在一些組織qi官交界處的cancer，只憑組織學基礎對cancer進行分類很困難,。如胃腸道梭形細胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤,，是間質起源的胃腸道間質瘤(GIST)，還是神經起源的神經鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細胞cancer,，兩者較難區(qū)別,，且醫(yī)療與預后明顯的不同，但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細胞cancer,，而角蛋白陽性則為胚胎cancer,。

免疫組化原理及實驗步驟——實驗外包。眾所周知,，抗體與抗原之間的結合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性,，即先將組織或細胞中的某些化學物質提取出來,，以其作為抗原或半抗原去免疫實驗動物，制備特異性抗體,，再用這種抗體（第1抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體,，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結合，形成抗原 - 一抗 - 二抗復合物,，將抗原放大,，由于抗體與抗原結合后形成的免疫復合物是無色的，因此,，還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應部位顯示出來,。通過抗原抗體反應及呈色反應，顯示細胞或組織中的化學成分,，在顯微鏡下可清晰看見細胞內發(fā)生的抗原抗體反應產物,，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。南京有靠譜的能做免疫組化的公司嗎,？

免疫組化應該選擇石蠟切片還是冰凍切片,？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是***我向一老師請教得出的結論,。因為作石蠟切片時要高溫烤片,，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定,，則可作石蠟切片,；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片,。

（2）冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,，做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構,，可能會使抗原彌散,；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮,。當你買一抗時,，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍,，就不能做石蠟,，如寫著兩者都可，那就都能做,。

（3）石蠟切片的優(yōu)點可以保持組織細胞的形態(tài)結構,，且容易存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩,，一定要存在-80度的低溫冰箱中,，尤其是用來做原位雜交的的切片，為了防止RNA降解,，保存一貫很重要,。由于石蠟切片可以切到4微米左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,，容易成功,，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。

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免疫組化的DAB顯色時間如何把握,？

1,、DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間,，到出現(xiàn)淺棕色本底時即可沖洗,；

2、DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色,，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長,，需要下調抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；

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3、此外,，若很短時間就出現(xiàn)背景很深,，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間,；

4,、DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4度過夜）,；另一方面就是封閉時間過長,。 湖南細胞免疫組化要多久