免疫組化實驗流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結免疫組化詳細步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水,。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內源性過氧化物酶活性,。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復：微波（建議30分鐘內4次中火）,、高壓,、酶修復方法。自然冷卻,，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘,，盡可能與二抗來源一致。傾去,，勿洗,。

6）滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（比較好復溫）,。PBS沖洗,，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標記的二抗,，室溫或37℃孵育30分鐘-1h,。

8）PBS沖洗，3分鐘×5次,。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶）,，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10）PBS沖洗,，3分鐘×5次,。

11）顯色劑顯色（DAB等）。

12）自來水充分沖洗,。

13）可進行復染,，脫水,，透明。

14）選擇適當的封片劑封片,。 有沒有做免疫組化比較好的公司,？浙江大鼠免疫組化檢測

實驗失敗常見問題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現所有的切片都成陰性？

答：這種現象主要是由操作不當導致,，可能的原因有：1.染色操作不當,，致使染色失敗,；2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性,；3.緩沖液中有疊氮化鈉，抑制了酶的活性,；4.復染或脫水劑使用不當等。建議逐一排查,，找到原因后重新進行實驗,。

在顯微鏡下觀察發(fā)現所有的切片都成陽性，這是為什么,？答：與上一個問題類似,，出現的原因也是試驗操作存在問題，可能的原因有：1.切片在染色過程中抗體過濃,，或者干片了,；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應時間過長；3.抗體溫育的時間過長等,。

在顯微鏡下觀察發(fā)現切片的背景很深,，這是為什么？答：以下幾方面會導致切片的背景過深：1.蛋白質封閉不夠或所用血清溶血,，造成抗體的非特異性反應,；2.內源性過氧化酶沒有完全阻斷，顯色過程中過氧化酶與酶底物反應,，造成背景,；3.底物呈色反應時間過長或呈色反應后漂洗不徹底。 浙江大鼠免疫組化檢測關于免疫組化的常見問題匯總,。

免疫組化實驗所用的組織和細胞標本是什么樣的,？

實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片,，后者包括組織印片,、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本**常用,、**基本的方法,，對于組織形態(tài)保存好,，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察,；還能長期存檔,，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響,，但可進行抗原修復,，是免疫組化中優(yōu)先的組織標本制作方法。

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免疫組化技術有哪些應用？

定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢,。相比于其他蛋白檢測方法,，免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高,，是定位檢測分析優(yōu)先方法,，尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。免疫組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面：惡性**的診斷與鑒別定性,；確定轉移性惡性**的原發(fā)部位,；對某類**進行進一步的病理分型；軟組織**診斷,；為臨床提供治療方案的選擇,；近年來，隨著免疫組織化學技術的發(fā)展和各種特異性抗體的出現,，使許多疑難**得到了明確診斷,。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可，其在低分化或未分化**的鑒別診斷時,，準確率可達50%-75%,。

免疫組化流程是什么樣的？

免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫(yī)生對其染色結果的判斷,，進而影響病理診斷,，所以制作一張良好的免疫組化切片至關重要，它需要病理醫(yī)生與病理技師兩者間的相互協(xié)調,，密切配合和共同努力,，病理醫(yī)生選擇抗體，設置對照,，判讀結果,，指導技術;而技術人員進行實驗操作，保證染色質量,。在免疫組化切片的制作過程存在多個環(huán)節(jié),，每一環(huán)節(jié)的失誤都可能影響檢測結果,，如抗原保存，蛋白酶消化,，增強技術及對抗體的管理,、使用和試劑的濃度等等，因此制作一張高質量的免疫組織化學切片是多方面相互配合的結果,。南京有靠譜的能做免疫組化的公司嗎,？湖北做得好的免疫組化

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免疫組化實驗所用的抗體

免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體,。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備,。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細胞克隆所產生的抗體混合物,。

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免疫組化常用的染色方法

根據標記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標法,，親和組織化學法,，后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,，有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,，其中生物素—抗生物素染色法常用。 浙江大鼠免疫組化檢測