細(xì)胞爬片免疫組化檢測實(shí)驗(yàn)步驟

1、選擇貼壁良好的細(xì)胞爬片,，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干,。

2、PBS洗3次,，每次5min,。3、切片放入3%過氧化氫溶液,，室溫下孵育10min,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。

4,、PBS洗3次,，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）,。

5,、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,，4℃過夜,。

6、PBS洗3次,，每次5min,。

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7、去除PBS液,，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,，4℃孵育50min。

8,、PBS洗3次,，每次5min。

9,、去除PBS液,，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色,。

10,、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗,，蘇木素復(fù)染,，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗,，氨水返藍(lán),，流水沖洗。

11,、切片經(jīng)過梯度酒精（70-100%）10min一個(gè)梯度,，脫水干燥，二甲苯透明,，中性樹膠封固,。 免疫組化結(jié)果怎么看？新疆病理免疫組化要多少錢

免疫組化如何才能充分脫蠟,？

 （1）蠟不溶于水,，如果脫蠟不干凈，少許蠟存留于切片上,，將會引起染色不均勻,、陽性物時(shí)隱時(shí)現(xiàn)、真假難辨,、背景染色增加等,。為了解決上述的問題，切片在染色前必須徹底脫蠟,，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯,，因它脫蠟力強(qiáng),，脫蠟時(shí)間較短； 

（2）脫蠟的時(shí)間要根據(jù)季節(jié),，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同,。如果在夏天，室溫較高,，脫蠟試劑也新鮮,，則脫蠟時(shí)間不需很多，3-5分鐘就已足夠,。如果在冬天,，室溫較低，脫蠟試劑也較陳舊,，則脫蠟時(shí)間需要延長,，10-20分鐘或更長。

（3）當(dāng)天切的切片,，燒烤2小時(shí)后進(jìn)行染色,，切片帶有溫度進(jìn)行脫蠟這將可加速脫蠟的過程，如果預(yù)先切好烤好的切片,，在染色前，還必須對切片進(jìn)行加溫10-20分鐘,，然后再行脫蠟,，這樣脫蠟速度加快，效果魁偉更好,?？傊僮鲿r(shí)應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié),，不同的室溫,，不同的試劑來決定，脫蠟的時(shí)間,，原則上是要徹底,、干凈、完全地脫去切片上的蠟,。

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免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片,？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,，這是***我向一老師請教得出的結(jié)論,。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片，可能會破壞組織的抗原性,，如果組織的抗原性較穩(wěn)定,，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的,，可作冰凍切片,。

（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步,。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),，可能會使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚,，做的片子沒石蠟的漂亮,。當(dāng)你買一抗時(shí)，目錄上都寫著做什么樣的切片,，如果它寫著只能做冰凍,，就不能做石蠟，如寫著兩者都可,，那就都能做,。

（3）石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，且容易存放在室溫,，而冰凍切片比較麻煩,，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來做原位雜交的的切片,，為了防止RNA降解,，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,，容易成功，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好,。

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免疫組化分類中,，免疫熒光方法,，英瀚斯生物為您進(jìn)行介紹。一開始建立的免疫組織化學(xué)技術(shù),。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,，先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,，在熒光顯微鏡下觀察,。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光,，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析,。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng),、靈敏度高、快速簡便,，所以在臨床病理診斷,、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣。免疫組化常見問題原因分析,！

免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本是什么樣的,？

實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片,，后者包括組織印片,、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用,、**基本的方法,，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片,，有利于各種染色對照觀察,；還能長期存檔，供回顧性研究,；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法,。

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免疫組化中IHC vs ICC的區(qū)別。英瀚斯生物為您說明,。除了生物學(xué)來源,，IHC和ICC在樣品處理的程度上也有所不同。ICC需要透化,，要么通過固定過程,，要么是單獨(dú)的透化步驟，這樣抗體才能與細(xì)胞內(nèi)的靶點(diǎn)相結(jié)合,。而IHC可能不要單獨(dú)的透化步驟,，這取決于切片的厚度和固定方法,。包埋在石蠟中的IHC切片必須進(jìn)一步處理，才能進(jìn)行抗體染色,。一旦處理好樣品,，IHC和ICC的染色操作就幾乎沒什么差異了。當(dāng)然,，就染色而言,，根據(jù)所使用的抗體來優(yōu)化還是少不了的。新疆病理免疫組化要多少錢