免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片,？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是***我向一老師請教得出的結(jié)論,。因為作石蠟切片時要高溫烤片,，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定,，則可作石蠟切片,；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片,。

（2）冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,，做免疫組化時不需抗原修復(fù)這一步。缺點是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),，可能會使抗原彌散,；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮,。當(dāng)你買一抗時,，目錄上都寫著做什么樣的切片,，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟,，如寫著兩者都可,，那就都能做。

（3）石蠟切片的優(yōu)點可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),，且容易存放在室溫,，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中,，尤其是用來做原位雜交的的切片,，為了防止RNA降解，保存一貫很重要,。由于石蠟切片可以切到4微米左右,，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功,，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好,。

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在臨床應(yīng)用中,，免疫組化還可以進(jìn)一步分類不同qi官與組織交界處cancer。由于重疊的特征,，在一些組織qi官交界處的cancer,，只憑組織學(xué)基礎(chǔ)對cancer進(jìn)行分類很困難。如胃腸道梭形細(xì)胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤,，是間質(zhì)起源的胃腸道間質(zhì)瘤(GIST),，還是神經(jīng)起源的神經(jīng)鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細(xì)胞cancer，兩者較難區(qū)別,，且醫(yī)療與預(yù)后明顯的不同,，但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細(xì)胞cancer，而角蛋白陽性則為胚胎cancer,。安徽病理免疫組化要多久動物,、細(xì)胞的免疫組化、免疫熒光,，就找英瀚斯生物,！

免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？ 

（1）縮短一抗/二抗孵育時間,、稀釋抗體來控制,。這是重要的一條,。

（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看,。

（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟,、腎臟等組織含量很高（含血細(xì)胞多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色,； 

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（4）非特異性組分與抗體結(jié)合,，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當(dāng)增加濃度來加強封閉效果； 

（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等,； 

（6）適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間,，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要,； 

（7）防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片,，這容易增強非特異性著色。

英瀚斯生物為您整理免疫組化實驗步驟

1,、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h,，脫蠟至水，用PBS沖洗三次,，每次5min,。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù),，中火至沸后斷電,，間隔10min低火至沸。

3,、自然冷卻后PBS洗3次,，每次5min。4,、切片放入3%過氧化氫溶液,，室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,。

5,、PBS洗3次，每次5min,，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）,。

6、去除BSA液,，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,，4℃過夜,。

7、PBS洗3次,，每次5min,。

8、去除PBS液,，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,，4℃孵育50min。

9,、PBS洗3次,，每次5min。

10,、去除PBS液,，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色,。

11,、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗,，蘇木素復(fù)染,，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗,，氨水返藍(lán),，流水沖洗。

12,、切片經(jīng)過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度,，脫水干燥，二甲苯透明,，中性樹膠封固。 英瀚斯生物免疫組化,，高效高質(zhì)量出結(jié)果,。

免疫組化的抗原修復(fù)

很多抗原的可視性可以通過抗原修復(fù)來提高，抗原修復(fù)可以打破福爾馬林固定時形成的蛋白質(zhì)交聯(lián),，從而使被掩藏的抗原顯現(xiàn)出來,。抗原修復(fù)技術(shù)包括不同時間長度的加熱或者利用蛋白酶來做酶消化,，例如蛋白酶K,，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加熱的方法通常會用到微波爐,，高壓鍋,，蒸箱或水浴,。將樣品在接近100°C高溫加熱20分鐘后再冷卻同等的時間。**常用的抗原修復(fù)液有a)檸檬酸鹽緩沖劑,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用檸檬酸鹽緩沖劑做抗原修復(fù)：檸檬酸鹽緩沖劑配方:10mM檸檬酸鈉,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM檸檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0將含有檸檬酸鈉或檸檬酸鹽緩沖劑的染色盤放到蒸箱或者水浴中,，預(yù)熱到95-100°C,。將切片浸沒于染色盤中。蓋子虛掩,，孵育20-40分鐘(研究者需自己決定比較好的孵育時間),。關(guān)掉蒸箱或水浴，將染色盤置于室溫下,，讓切片冷卻20分鐘,。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分鐘,。開始封閉步驟,。 免疫組化結(jié)果怎么看？湖南細(xì)胞免疫組化哪家好

常見的免疫組化方法有哪些,？安徽病理免疫組化要多久

免疫組化分類中,，免疫熒光方法，英瀚斯生物為您進(jìn)行介紹,。一開始建立的免疫組織化學(xué)技術(shù),。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標(biāo)上熒光素,，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光,，從而可確定組織中某種抗原的定位,，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強,、靈敏度高,、快速簡便，所以在臨床病理診斷,、檢驗中應(yīng)用比較廣,。安徽病理免疫組化要多久