做免疫組化時(shí)如何選擇一抗,？

1、單克隆和多克隆抗體的選擇,。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣,。另一方面,，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體,，形成好幾種單克隆抗體混雜物,，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,，一般單克隆抗體特異性強(qiáng),，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低,；而多克隆抗體特異性稍弱,，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高,，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過(guò)封閉等避免）,。

2、應(yīng)用范圍的選擇,。有的一抗只能用于Westernblotting,，或免疫組化、免疫熒光,、免疫沉淀等,；甚至標(biāo)明石蠟切片或冰凍切片。

3,、種屬反應(yīng)性的選擇（speciesreactivity）,。這一點(diǎn)很重要，表明這種抗體可能存在種屬差別,，且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原,。

4,、種屬來(lái)源，一般兔來(lái)源的多是多克隆抗體,；而小鼠來(lái)源的多是單克隆抗體,，但也有另外。根據(jù)此來(lái)源來(lái)選擇相應(yīng)的二抗,。

5,、生產(chǎn)廠家的選擇。

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免疫組化的局限性,，可能會(huì)有假陽(yáng)性,。陽(yáng)性信號(hào)定位不正確即為假陽(yáng)性，包括著色不勻,、背景著色,、邊緣效應(yīng)，另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果,。假陽(yáng)性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷?，抗體有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用，過(guò)期的抗體或者不著色,，或者背景著色,，形成假陽(yáng)性;(2)試劑未充分覆蓋組織，組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),，由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短,，冬季孵育時(shí)間稍長(zhǎng);(4)操作過(guò)程中組織變干，造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,，產(chǎn)生假陽(yáng)性;(5)3,，3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長(zhǎng)，DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,，配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),，因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色，如內(nèi)源性酶血紅蛋白,、肌紅蛋白等造成的著色,，可以通過(guò)血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見(jiàn)于壞死組織中,，使壞死組織呈較高的背景染色,，在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。青海什么是免疫組化推薦有沒(méi)有能做免疫組化的實(shí)驗(yàn)外包公司,？效果好一點(diǎn)的,。

免疫組化有哪幾種分類 ,？

 1）按標(biāo)記物質(zhì)的種類，如熒光染料,、放射性同位素、酶（主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶）,、鐵蛋白,、膠體金等，可分為免疫熒光法,、放射免疫法,、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。

 2）按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步,、三步或多步法）,。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多,。

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3）按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,，如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶（***）法,；親和連接，如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）法,、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)（SP）法等,，其中SP法是比較常用的方法；聚合物鏈接,，如即用型二步法,，此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。

什么是免疫組化,？免疫組化的原理是什么,？

1、定義：用標(biāo)記的特異性抗體對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性,、定位或定量研究,，這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry）技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）技術(shù)。

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2、原理：根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合,，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng),，前者再用標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合,，通過(guò)呈色反應(yīng)或熒光來(lái)顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分,，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量,。 大鼠,、小鼠組織免疫組化，找英瀚斯生物,。

免疫組化的局限性,。靈敏度高、精確性和特異性是一種理想的cancer標(biāo)記物必須具有的,，但至今所發(fā)現(xiàn)的cancer標(biāo)記物還沒(méi)有能完全滿足這些標(biāo)準(zhǔn),。某些正常細(xì)胞也分泌一些cancer標(biāo)記物，因此cancer細(xì)胞學(xué)并不是單獨(dú)產(chǎn)生一種標(biāo)記物,，即選用一組抗體比單一抗體更有利,。在cancer診斷中評(píng)估免疫組化的局限性主要在抗體特異性和解釋方面。在免疫組化操作中都必須有適當(dāng)?shù)年?yáng)性與陰性對(duì)照,，作為技術(shù)完整性質(zhì)量控制,，如對(duì)照組被忽略或不理想時(shí)，免疫組化染色的結(jié)果要謹(jǐn)慎對(duì)待,，免疫組化的正確結(jié)果不僅要依靠技術(shù)步驟上規(guī)范化操作,，而且有賴于正確的解釋，在報(bào)告免疫組化染色結(jié)果時(shí)不應(yīng)孤立地解釋,，應(yīng)考慮到診斷與鑒別診斷,、所應(yīng)用的抗體特性、所研究組織性質(zhì),，同時(shí)還要注意假陽(yáng)性與假陰性結(jié)果的干擾,。免疫組化結(jié)果怎么看？遼寧靠譜免疫組化哪家好

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免疫組化技術(shù)有哪些應(yīng)用,？

定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢(shì),。相比于其他蛋白檢測(cè)方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確,、定性靈敏度高,，是定位檢測(cè)分析優(yōu)先方法，尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用,。免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面：惡性**的診斷與鑒別定性,；確定轉(zhuǎn)移性惡性**的原發(fā)部位；對(duì)某類**進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型,；軟組織**診斷,；為臨床提供治療方案的選擇；近年來(lái)，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn),，使許多疑難**得到了明確診斷,。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實(shí)用價(jià)值受到了普遍的認(rèn)可，其在低分化或未分化**的鑒別診斷時(shí),，準(zhǔn)確率可達(dá)50%-75%,。

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