免疫組化指的是根據(jù)抗體與抗原特異結(jié)合的原理來(lái)檢測(cè)組織切片中的抗原（如蛋白）,。immuno的詞根來(lái)自操作中所使用的抗體,，而histo意味著組織,。另一種類似的技術(shù)是免疫細(xì)胞化學(xué)（Immunocytochemistry,，簡(jiǎn)稱ICC）,。這兩個(gè)詞大家經(jīng)?；熘?，看著好像差不多,，但實(shí)際上還是有點(diǎn)區(qū)別,。IHCvsICC對(duì)于IHC，組織是來(lái)自患者或動(dòng)物,，經(jīng)過(guò)冷凍或石蠟包埋,。將這些組織制成約4μm厚的切片，封片后再處理。通過(guò)這種方法,，研究人員可觀察細(xì)胞組分的定位,，同時(shí)維持周?chē)M織的原先結(jié)構(gòu)。對(duì)于ICC,，大部分細(xì)胞外基質(zhì)及其他基質(zhì)組分被去除,，只剩下整個(gè)細(xì)胞來(lái)染色。ICC的來(lái)源可以是細(xì)胞懸液,，來(lái)自患者或動(dòng)物（如血涂片,、拭子等），或在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的組織培養(yǎng)細(xì)胞系,。 免疫組化可以看什么,？遼寧病理免疫組化價(jià)格

免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,，這是***我向一老師請(qǐng)教得出的結(jié)論,。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片，可能會(huì)破壞組織的抗原性,，如果組織的抗原性較穩(wěn)定,，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的,，可作冰凍切片,。

（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步,。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),，可能會(huì)使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚,，做的片子沒(méi)石蠟的漂亮,。當(dāng)你買(mǎi)一抗時(shí)，目錄上都寫(xiě)著做什么樣的切片,，如果它寫(xiě)著只能做冰凍,，就不能做石蠟，如寫(xiě)著兩者都可,，那就都能做,。

（3）石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，且容易存放在室溫,，而冰凍切片比較麻煩,，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來(lái)做原位雜交的的切片,，為了防止RNA降解,，保存一貫很重要,。由于石蠟切片可以切到4微米左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,，容易成功,，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。

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免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些,？

1、抗體濃度和質(zhì)量問(wèn)題以及抗體來(lái)源選擇錯(cuò)誤,。不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,，抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng),，必須摸索比較好濃度,。

2、抗原修復(fù)不全,，對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來(lái)打開(kāi)抗原表位,，以利于與抗體結(jié)合；建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試,。有人做過(guò)實(shí)驗(yàn),，這是比較好的時(shí)間和次數(shù)。若不行,，還可高壓修復(fù),。

3、組織切片本身這種抗原含量低,。

4,、血清封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

5,、DAB孵育時(shí)間過(guò)短,。

6、細(xì)胞通透不全,，抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng),。

7、開(kāi)始做免疫組化,，建議一定要首先做個(gè)陽(yáng)性對(duì)照片,，排除抗體等問(wèn)題。

免疫組化分類中免疫酶標(biāo)方法,，英瀚斯生物為您介紹,。免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,，于60年代發(fā)展起來(lái)的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,，通過(guò)光鏡或電鏡,，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前定位準(zhǔn)確,、對(duì)比度好,、染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，適合于光,、電鏡研究等,。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,，目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬***法（過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶）,、ABC法（卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物）、SP法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶）,、即用型二步法（聚合物鏈接）等,。免疫組化的樣本保存要求是什么？

細(xì)胞爬片免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟

1,、選擇貼壁良好的細(xì)胞爬片,，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2,、PBS洗3次,，每次5min。3,、切片放入3%過(guò)氧化氫溶液,，室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,。

4,、PBS洗3次，每次5min,，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）,。

5、去除BSA液,，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,，4℃過(guò)夜。

6,、PBS洗3次,，每次5min,。

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7,、去除PBS液,，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗，4℃孵育50min,。

8,、PBS洗3次，每次5min,。

9,、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,，顯微鏡控制顯色,。

10、顯色完全后,，蒸餾水或自來(lái)水沖洗,，蘇木素復(fù)染,，1%鹽酸酒精分化（1s）,，自來(lái)水沖洗，氨水返藍(lán),，流水沖洗,。

11、切片經(jīng)過(guò)梯度酒精（70-100%）10min一個(gè)梯度,，脫水干燥,，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固,。 免疫組化protocol,，詳情請(qǐng)看英瀚斯生物官網(wǎng)。江西做得好的免疫組化哪家好

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免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？ 

（1）縮短一抗/二抗孵育時(shí)間,、稀釋抗體來(lái)控制,。這是重要的一條。

（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,，建議試用單克隆抗體看看,。

（3）內(nèi)源性過(guò)氧化物酶和生物素在肝臟,、腎臟等組織含量很高（含血細(xì)胞多的組織），需要通過(guò)延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來(lái)降低背景染色,； 

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（4）非特異性組分與抗體結(jié)合,，這需要通過(guò)延長(zhǎng)二抗來(lái)源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來(lái)加強(qiáng)封閉效果； 

（5）縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過(guò)氧化氫濃度等,； 

（6）適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間,，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要,； 

（7）防止標(biāo)本染色過(guò)程中出現(xiàn)干片,，這容易增強(qiáng)非特異性著色。 遼寧病理免疫組化價(jià)格

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