免疫組化的顯色系統(tǒng)

免疫組化的顯色系統(tǒng)是將抗原-抗體反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可見信號的關(guān)鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統(tǒng)有DAB（3,3'-二氨基聯(lián)苯胺）和AEC（3-氨基-9-乙基咔唑）,。DAB顯色產(chǎn)生棕色沉淀,，適用于光學(xué)顯微鏡觀察。AEC顯色產(chǎn)生紅色沉淀,，適用于光學(xué)顯微鏡觀察,，但不適合長期保存。此外,，還有熒光顯色系統(tǒng),，如FITC（異硫氰酸熒光素）和TRITC（四甲基羅丹明異硫氰酸酯），適用于熒光顯微鏡觀察,。選擇合適的顯色系統(tǒng)需要考慮實驗?zāi)康暮蜋z測設(shè)備,。 有沒有做免疫組化比較好的公司？寧夏細胞免疫組化實驗

免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些,？

1,、抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯誤。不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽性結(jié)果,，抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng),，必須摸索比較好濃度。

2,、抗原修復(fù)不全,，對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位，以利于與抗體結(jié)合,；建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試,。有人做過實驗，這是比較好的時間和次數(shù),。若不行,，還可高壓修復(fù),。

3、組織切片本身這種抗原含量低,。

4,、血清封閉時間過長。

5,、DAB孵育時間過短,。

6、細胞通透不全,，抗體未能充分進入胞內(nèi)參與反應(yīng),。

7、開始做免疫組化,，建議一定要首先做個陽性對照片,，排除抗體等問題。 吉林細胞免疫組化怎么樣臨床樣本檢測,，免疫組化,，英瀚斯生物專業(yè)病理。

免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫(yī)生對其染色結(jié)果的判斷,，進而影響病理診斷,，所以制作一張良好的免疫組化切片至關(guān)重要，它需要病理醫(yī)生與病理技師兩者間的相互協(xié)調(diào),，密切配合和共同努力,，病理醫(yī)生選擇抗體，設(shè)置對照,，判讀結(jié)果,，指導(dǎo)技術(shù);而技術(shù)人員進行實驗操作，保證染色質(zhì)量,。在免疫組化切片的制作過程存在多個環(huán)節(jié),，每一環(huán)節(jié)的失誤都可能影響檢測結(jié)果，如抗原保存,，蛋白酶消化,，增強技術(shù)及對抗體的管理、使用和試劑的濃度等等,，因此制作一張高質(zhì)量的免疫組織化學(xué)切片是多方面相互配合的結(jié)果,。

免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？ 

（1）縮短一抗/二抗孵育時間,、稀釋抗體來控制,。這是重要的一條。

（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,，建議試用單克隆抗體看看,。

（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細胞多的組織）,，需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色,； 

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（4）非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當(dāng)增加濃度來加強封閉效果,； 

（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等,； 

（6）適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間，在一抗,、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要,； 

（7）防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強非特異性著色,。 免疫組化流程是什么樣的,？

免疫組化技術(shù)有哪些應(yīng)用？

定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢,。相比于其他蛋白檢測方法,，免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高,，是定位檢測分析優(yōu)先方法,，尤其對于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面：惡性**的診斷與鑒別定性,；確定轉(zhuǎn)移性惡性**的原發(fā)部位,；對某類**進行進一步的病理分型；軟組織**診斷,；為臨床提供治療方案的選擇,；近年來，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn),，使許多疑難**得到了明確診斷,。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可，其在低分化或未分化**的鑒別診斷時,，準確率可達50%-75%,。

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免疫組化如何才能充分脫蠟？

 （1）蠟不溶于水，如果脫蠟不干凈,，少許蠟存留于切片上,，將會引起染色不均勻、陽性物時隱時現(xiàn),、真假難辨,、背景染色增加等。為了解決上述的問題,，切片在染色前必須徹底脫蠟,，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強,，脫蠟時間較短,； 

（2）脫蠟的時間要根據(jù)季節(jié)，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同,。如果在夏天,，室溫較高，脫蠟試劑也新鮮,，則脫蠟時間不需很多,，3-5分鐘就已足夠。如果在冬天,，室溫較低,，脫蠟試劑也較陳舊，則脫蠟時間需要延長,，10-20分鐘或更長,。

（3）當(dāng)天切的切片，燒烤2小時后進行染色,，切片帶有溫度進行脫蠟這將可加速脫蠟的過程,，如果預(yù)先切好烤好的切片，在染色前,，還必須對切片進行加溫10-20分鐘,，然后再行脫蠟，這樣脫蠟速度加快,，效果魁偉更好,。總之,，操作時應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié),，不同的室溫，不同的試劑來決定,，脫蠟的時間,，原則上是要徹底,、干凈、完全地脫去切片上的蠟,。

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