免疫組化原理及實(shí)驗(yàn)步驟——實(shí)驗(yàn)外包。眾所周知,,抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,。免疫組化正是利用這一特性,即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來,,以其作為抗原或半抗原去免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,,制備特異性抗體,再用這種抗體(第1抗體)作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體,,并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合,,形成抗原 - 一抗 - 二抗復(fù)合物,將抗原放大,,由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的,,因此,,還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),,顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分,,在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布,、含量,。如何做好免疫組化實(shí)驗(yàn)?湖北什么是免疫組化注意事項(xiàng)
免疫組化臨床應(yīng)用中,,可以對傳染性疾病診斷,。應(yīng)用抗病毒、細(xì)菌,、zhen菌和寄生蟲抗原的特異性抗體進(jìn)行免疫組化染色,,可以檢測和診斷許多傳染性疾病病原微生物,如乙型肝炎病毒(HBV),、巨細(xì)胞病毒(CMV)、人乳T狀瘤病毒(HPV),、皰疹病毒(HSV),、丙型肝炎病毒(HVC)、細(xì)小病毒B19,、人禽流行性感冒病毒(AIV),、嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS)等等,由于免疫組化在傳染性疾病診斷中具有及時(shí)性,、低風(fēng)險(xiǎn)性,、高敏感性、特異性,、有效性等特點(diǎn),,可以用于(1)用于人類新病原微生物的識別;(2)提供快速的形態(tài)學(xué)診斷,使嚴(yán)重傳染性疾病得以早期醫(yī)療;(3)在無法取得新鮮組織或尚無培養(yǎng)方法的情況下,,提供診斷并對發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究和認(rèn)識,。英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),一站式醫(yī)學(xué)科研平臺,。甘肅組織免疫組化是什么病理免疫組化多少錢,?
免疫組化的抗原修復(fù)技術(shù)
抗原修復(fù)是免疫組化實(shí)驗(yàn)中的重要步驟,目的是暴露被固定過程掩蓋的抗原表位,。常用的抗原修復(fù)方法有熱修復(fù)和酶消化,。免疫組化熱修復(fù)是通過加熱(如微波或高壓)使蛋白質(zhì)變性,暴露抗原表位,。常用的緩沖液有檸檬酸鹽緩沖液和EDTA緩沖液,。酶消化是通過蛋白酶(如胰蛋白酶)消化部分蛋白質(zhì),,暴露抗原表位。免疫組化實(shí)驗(yàn)中不同的抗原修復(fù)方法適用于不同的抗原和抗體,,需要根據(jù)免疫組化具體實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整,。
臨床應(yīng)用中,藥物靶點(diǎn)免疫組化,,英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),,一站式醫(yī)學(xué)科研平臺。免疫組化及分子病理學(xué)方法在疾病診斷中只只起輔助醫(yī)療的作用,,而藥物病理學(xué)是用病理學(xué)的方法確定藥物醫(yī)療的靶點(diǎn)、評價(jià)藥物醫(yī)療的療效,、預(yù)測藥物醫(yī)療的反應(yīng),,因此藥物靶點(diǎn)免疫組化屬“單獨(dú)的診斷”,。因此對于對照的設(shè)置,、質(zhì)量的控制均需要更高的要求,,如對試劑的要求,,不同于一般的診斷試劑,應(yīng)按對藥物管理的要求操作,。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫(yī)生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫(yī)療的依據(jù),。英瀚斯生物為您詳解免疫組化實(shí)驗(yàn)指南,!
免疫組化的局限性,,可能會有假陽性,。陽性信號定位不正確即為假陽性,,包括著色不勻,、背景著色,、邊緣效應(yīng),,另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽性結(jié)果,。假陽性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷?,抗體有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用,,過期的抗體或者不著色,或者背景著色,,形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織,,組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過長,由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短,,冬季孵育時(shí)間稍長;(4)操作過程中組織變干,,造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,,產(chǎn)生假陽性;(5)3,,3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長,DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,,配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),,因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色,,如內(nèi)源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色,,可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也會產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中,,使壞死組織呈較高的背景染色,,在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。英瀚斯生物免疫組化,,高效高質(zhì)量出結(jié)果。河北免疫組化可以做什么
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免疫組化的優(yōu)缺點(diǎn)
免疫組化的優(yōu)點(diǎn)在于其高特異性和敏感性,,能夠在組織原位檢測目標(biāo)蛋白的表達(dá)和分布,。此外,,免疫組化可以與其他技術(shù)(如熒光顯微鏡,、電子顯微鏡)結(jié)合,,提供更豐富的信息,。然而,,免疫組化也存在一些缺點(diǎn),。首先,實(shí)驗(yàn)步驟復(fù)雜,,需要優(yōu)化多個(gè)參數(shù)(如一抗?jié)舛?、孵育時(shí)間)。其次,,免疫組化的結(jié)果可能受到組織固定,、抗原修復(fù)等因素的影響,導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果,。此外,,免疫組化的定量分析相對困難,通常只能進(jìn)行半定量分析,。 湖北什么是免疫組化注意事項(xiàng)