細(xì)胞屬性的判定,,免疫組化也可以進(jìn)行這方面的臨床應(yīng)用,。通過特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原成分,來判定細(xì)胞的屬性,確定cancer的來源,。如細(xì)胞角蛋白(CK)是上皮性標(biāo)記,CK陽性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標(biāo)記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽性則提示膠質(zhì)cancer;CD20和CD79a陽性則提示B細(xì)胞淋巴瘤;平滑肌肌動(dòng)蛋白(Actin)陽性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質(zhì)瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽性;血管源性cancer中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34陽性等等,。如果您需要做實(shí)驗(yàn)外包,,可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。做免疫組化意味什么,?陜西小鼠免疫組化怎么選擇
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本是什么樣的,?
實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,,后者包括組織印片,、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用,、**基本的方法,,對(duì)于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,,有利于各種染色對(duì)照觀察,;還能長(zhǎng)期存檔,供回顧性研究,;石蠟切片制作過程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法,。
英瀚斯生物具有專業(yè)病理團(tuán)隊(duì),,染色分析一站搞定,! 內(nèi)蒙古小鼠免疫組化有沒有推薦的免疫組化外包公司?
關(guān)于免疫組化的封閉:用和二抗來源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min,,然后甩去封閉用血清,,勿洗;注意:封閉時(shí)間根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整,;封閉液一般選用5%BSA或與二抗來源一致的血清,,切記是BSA,不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了,。①使用血清好還是BSA好,?答:***是待檢樣本會(huì)非特異性的和蛋白結(jié)合,從而導(dǎo)致背景過高,,因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合,,從這點(diǎn)看,BSA和血清沒有明顯區(qū)別,。第二是待檢樣本中可能會(huì)有Fc受體,,可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合,與抗體特異性無關(guān),,封閉血清中有抗體,,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無法封閉Fc受體,。
做免疫組化時(shí)如何選擇一抗,?
1、單克隆和多克隆抗體的選擇,。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣,。另一方面,,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體,,形成好幾種單克隆抗體混雜物,,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),,但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低,;而多克隆抗體特異性稍弱,,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等避免),。
2,、應(yīng)用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting,,或免疫組化,、免疫熒光、免疫沉淀等,;甚至標(biāo)明石蠟切片或冰凍切片,。
3、種屬反應(yīng)性的選擇(speciesreactivity),。這一點(diǎn)很重要,,表明這種抗體可能存在種屬差別,且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原,。
4,、種屬來源,一般兔來源的多是多克隆抗體,;而小鼠來源的多是單克隆抗體,,但也有另外。根據(jù)此來源來選擇相應(yīng)的二抗,。
5、生產(chǎn)廠家的選擇,。
免疫組化公司哪家好,?
免疫組化的優(yōu)缺點(diǎn)
免疫組化的優(yōu)點(diǎn)在于其高特異性和敏感性,能夠在組織原位檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá)和分布,。此外,,免疫組化可以與其他技術(shù)(如熒光顯微鏡、電子顯微鏡)結(jié)合,,提供更豐富的信息,。然而,免疫組化也存在一些缺點(diǎn),。首先,,實(shí)驗(yàn)步驟復(fù)雜,需要優(yōu)化多個(gè)參數(shù)(如一抗?jié)舛?、孵育時(shí)間),。其次,免疫組化的結(jié)果可能受到組織固定,、抗原修復(fù)等因素的影響,,導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果。此外,免疫組化的定量分析相對(duì)困難,,通常只能進(jìn)行半定量分析,。 免疫組化方法步驟是什么??jī)?nèi)蒙古小鼠免疫組化
做好免疫組化,,你需要了解這些,!陜西小鼠免疫組化怎么選擇
免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)總結(jié):
?本實(shí)驗(yàn)室所用切片一般是石蠟切片。
?烘片:使蠟片水分蒸發(fā),,石蠟軟化,,組織切片牢固貼在玻片上;烘片至跟烘片前透明度有差異,。
?抗原修復(fù)時(shí),,使片子始終浸沒在修復(fù)液中,液體不能干,。
?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱,,濕盒放置1h,省時(shí)間和結(jié)合效果好,,不要超過1h,,容易過染。
做免疫組化及各類染色切片,,就找英瀚斯生物,!
?二抗使用:兩個(gè)二抗放大信號(hào)或一個(gè)二抗;若抗體信號(hào)強(qiáng),,可不用放大信號(hào),,盡量增大信噪比。
?10XDAB在常溫溶解,,盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配,,放于4度儲(chǔ)存時(shí)間久了效果不佳。
?復(fù)水和脫水時(shí)所用的梯度酒精不可混用,,要區(qū)分開,。
?加抗體和顯色液時(shí),都要將片子甩干,,在半干半濕的狀態(tài)下再加,,不然容易造成溶液的二次稀釋。
?整個(gè)操作過程中在顯色之前,,一定不能干片,。 陜西小鼠免疫組化怎么選擇