HE染色病理技術(shù)中**常用的一種方法,,通過它可以做出病理診斷和發(fā)現(xiàn)尋求別的輔助方法,,以達(dá)到準(zhǔn)確,完整的病理診斷,。一,、染色目的 病理學(xué)的所有切片,都必須通過一種以上的染料,,通過各種不同的方法,,將切片中各種不同的物質(zhì),在不同染液的作用下,,將其顯示出來,,使之在光學(xué)顯微鏡下,能夠完全的觀看各種結(jié)構(gòu),。例如,HE染色,,好質(zhì)量的切片可以清晰地顯示出多不同的結(jié)構(gòu),,細(xì)胞核著藍(lán)黑色,細(xì)胞漿著粉紅色,,軟骨著藍(lán)色等,。清晰的結(jié)構(gòu)為診斷提供的依據(jù),因此,,染色技術(shù)也是病理技術(shù)中的重要組成部分,,必須不斷地總結(jié),方能提高,。比較基礎(chǔ)的病理染色HE染色,。云南HE染色價(jià)格
HE染色常見問題:Q3:細(xì)胞核染色過淺,顏色暗淡答:切片在蘇木素染液中停留過短,,或蘇木素過度氧化失效,,或分化時(shí)間太長(zhǎng)。對(duì)策:重新染色,。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉,、0.5%氨水、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液,,每個(gè)3-5min即可,,接著重新染色??梢赃m當(dāng)?shù)亟M織的嗜堿性以增強(qiáng)核染色,,如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3h,自來水沖洗5-10min染色,,或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h,,自來水沖洗10min染色。Q4:細(xì)胞核染色過深,,胞漿著藍(lán)色答:切片在蘇木素染液中停留過長(zhǎng),;或切片太厚;或分化時(shí)間太短,。這種情況首先鏡下看看切片厚度(比較好厚度1-2層細(xì)胞核),,要么重新染色,要么重新制片,。南京英瀚斯,,專業(yè)的病理染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)平臺(tái)。重慶HE染色價(jià)格HE染色取材,、染色以及分析方法介紹,。
HE染色常見問題:Q5:細(xì)胞核呈棕紅色改變答:蘇木素染液過度氧化;或蘇木素染色后反藍(lán)不足導(dǎo)致,。應(yīng)該立即更換蘇木素染色液,。或在流動(dòng)自來水(一般自來水PH7.5-7.8),,或在稀釋的氨水溶液,,或在0.2%碳酸氫鈉中適當(dāng)浸泡,這些步驟均可一定程度地加強(qiáng)蘇木素染色后的反藍(lán)效果,。Q6:伊紅染色較淡答:伊紅的PH改變了(PH可能已大于5),;或反藍(lán)液體未漂洗干凈,殘留后影響胞漿嗜酸性染色,;或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久,。對(duì)策:檢查伊紅染色液PH,可采用乙酸調(diào)至4.6-5.0,。根據(jù)以上提示,,調(diào)整實(shí)驗(yàn)步驟。
HE染色反藍(lán)的原理:蘇木素染液,,細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,,兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,,很容易與帶正電荷的蘇木素精堿性染料以離子或氫鍵結(jié)合而被染色,。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色,。 分化:蘇木素染色之后,,用水洗去未結(jié)合在細(xì)胞上的染液,但是在細(xì)胞核中結(jié)合過多的染料和細(xì)胞漿中吸附的染料必須用分化液1%鹽酸酒精脫去,,才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色的分明,,把這個(gè)過程稱為染色的分化作用。因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),,使色素與組織解離,,分化不可過度。藍(lán)化:分化之后蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),,在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),,而呈藍(lán)色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,,再用弱堿性水使蘇木精染上的細(xì)胞核變呈藍(lán)色,,稱藍(lán)化作用,一般多用自來水浸洗即可變藍(lán),,也可用溫水(50度溫水比較好)變藍(lán),。HE染色是常見的病理染色,是比較基礎(chǔ)是病理染色之一,。
HE染色不管怎么操作,,始終無法染色或淡染答:這種情況一般因?yàn)榻M織固定時(shí)采用了酸性甲醛;或者組織在甲醛中浸泡時(shí)間太長(zhǎng);或者久置的甲醛變性分解為甲酸。補(bǔ)救:防患于未然,,要么使用新鮮的中性甲醛固定,要么在存放的甲醛中加一點(diǎn)碳酸鈉中和甲酸,。對(duì)于已經(jīng)固定的組織可考慮再次固定,;對(duì)于已經(jīng)制出的片子,染色前采用5%重鉻酸鉀溶液浸泡半小時(shí)以上,,然后自來水漂洗5min,,可改善染色。也可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中,,補(bǔ)充染色媒介,,增強(qiáng)蘇木素與組織的親和力(蘇木素染色必須要媒介才能染上,單純的蘇木素與組織的親和力很弱),。腦組織HE染色如何觀察,?云南HE染色價(jià)格
冰凍切片是否可以做HE染色?云南HE染色價(jià)格
HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項(xiàng):多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會(huì)被氧化為酸,使溶液pH降低,,從而影響染色,。不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間,。多聚甲醛雖然作用溫和,,但能硬化組織,固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,,切片時(shí)易碎,。因此固定時(shí)間通常不宜超過24小時(shí)。多聚甲醛可長(zhǎng)期存在于固定過的細(xì)胞或組織樣品中,,固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時(shí)仍會(huì)有殘留,,因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛,。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,,使之不能充分暴露,,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果,。因此,,4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),,然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作,。云南HE染色價(jià)格