免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷,，英瀚斯生物為您介紹。對于反應(yīng)性增生還是cancer性增生,，可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測B淋巴細胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別,。在濾泡反應(yīng)性增生時,，濾泡反應(yīng)中心的細胞不表達細胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中,，由于90%以上cancer性濾泡細胞有bcl-2的高表達,，bcl-2陽性。而增殖細胞核抗原(PCNA),，周期素(Cycling),，核抗原(Ki-67)通過對cancer細胞增生的程度作出評價，從而提示增生細胞的良惡性,。英瀚斯生物為您詳解免疫組化實驗指南！河南大鼠免疫組化是什么

免疫組化的DAB顯色時間如何把握,？

1、DAB顯色時間不是固定的,，主要由顯微鏡下控制顯色時間,，到出現(xiàn)淺棕色本底時即可沖洗；

2,、DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色,，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間,；

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3、此外,，若很短時間就出現(xiàn)背景很深,，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,，需要延長封閉時間；

4,、DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4度過夜）,；另一方面就是封閉時間過長,。 切片免疫組化價格做好免疫組化,，你需要了解這些,！

免疫組化實驗所用的抗體

免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,，應(yīng)用細胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備,。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清,，是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物,。

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免疫組化常用的染色方法

根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法,，親和組織化學(xué)法,，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高,，有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法常用,。

免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些,？

1、抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯誤,。不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽性結(jié)果,，抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng)，必須摸索比較好濃度,。

2,、抗原修復(fù)不全，對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位,，以利于與抗體結(jié)合,；建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過實驗,，這是比較好的時間和次數(shù),。若不行，還可高壓修復(fù),。

3,、組織切片本身這種抗原含量低。

4,、血清封閉時間過長,。

5、DAB孵育時間過短,。

6,、細胞通透不全,，抗體未能充分進入胞內(nèi)參與反應(yīng)。

7,、開始做免疫組化,，建議一定要首先做個陽性對照片，排除抗體等問題,。 英瀚斯生物,，專業(yè)病理老師負責(zé)免疫組化外包！

免疫組化的局限性,，可能會有假陽性,。陽性信號定位不正確即為假陽性，包括著色不勻,、背景著色,、邊緣效應(yīng)，另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽性結(jié)果,。假陽性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷?，抗體有一個合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用，過期的抗體或者不著色,，或者背景著色,，形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織，組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時間過長,，由于室溫的影響夏季孵育時間稍短,，冬季孵育時間稍長;(4)操作過程中組織變干，造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,，產(chǎn)生假陽性;(5)3,，3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時間太長，DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,，配制時間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),，因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色，如內(nèi)源性酶血紅蛋白,、肌紅蛋白等造成的著色,，可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細胞、淋巴細胞也會產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中,，使壞死組織呈較高的背景染色,，在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。免疫組化的那些小知識,，都在這里,！內(nèi)蒙古大鼠免疫組化

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實驗失敗常見問題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陰性,？

答：這種現(xiàn)象主要是由操作不當(dāng)導(dǎo)致,，可能的原因有：1.染色操作不當(dāng),，致使染色失敗,；2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性,；3.緩沖液中有疊氮化鈉，抑制了酶的活性,；4.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)?shù)?。建議逐一排查，找到原因后重新進行實驗,。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陽性,，這是為什么？答：與上一個問題類似,，出現(xiàn)的原因也是試驗操作存在問題,，可能的原因有：1.切片在染色過程中抗體過濃，或者干片了,；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應(yīng)時間過長,；3.抗體溫育的時間過長等。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)切片的背景很深,，這是為什么,？答：以下幾方面會導(dǎo)致切片的背景過深：1.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血，造成抗體的非特異性反應(yīng),；2.內(nèi)源性過氧化酶沒有完全阻斷，顯色過程中過氧化酶與酶底物反應(yīng),，造成背景,；3.底物呈色反應(yīng)時間過長或呈色反應(yīng)后漂洗不徹底。 河南大鼠免疫組化是什么

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