透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評(píng)估外泌體形態(tài),、大小和表型的的兩種常見(jiàn)的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,，該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測(cè)電子類別，在SEM中,，電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,，捕獲并檢測(cè)散射的電子，從而生成粒子圖像,。但是,，在TEM中，不與粒子相互作用的電子穿過(guò)樣品,，并使用熒光屏進(jìn)行檢測(cè),。電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高,，外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,，不適合進(jìn)行大量快速的測(cè)量,；而且由于樣本經(jīng)過(guò)了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過(guò)程,，對(duì)生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞,，從而影響觀察的效果，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量外泌體濃度,。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,，生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn),，難以普遍普及,。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響,。上海外泌體tmt

外泌體的臨床應(yīng)用：間充質(zhì)干細(xì)胞是目前較普遍使用的細(xì)胞類型,，它具有自我更新，多向分化,、分泌細(xì)胞因子和細(xì)胞外囊泡體,、免疫調(diào)節(jié)、來(lái)源普遍等特點(diǎn),，在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果,。間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體與間充質(zhì)干細(xì)胞有著相似的功能，包括修復(fù)與再生組織,、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫,，但外泌體相對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞又有許多優(yōu)勢(shì)。首先,，間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體更穩(wěn)定,，更好保存,，易于管理和控制，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量,。其次,，它們沒(méi)有活細(xì)胞，不會(huì)像間充質(zhì)干細(xì)胞那樣可能會(huì)過(guò)多增殖而放大療效或者病變導(dǎo)致疾病加重,；另外,，它有可能避免某些針對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控問(wèn)題，間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體有代替間充質(zhì)干細(xì)胞的趨勢(shì),。血漿血清外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家建立外泌體分離,、表征以及效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問(wèn)題。

尺寸排阻色譜法（SEC）根據(jù)大小來(lái)分離樣本,。該技術(shù)應(yīng)用了一個(gè)裝有多孔聚合物珠的色譜柱,，該聚合物珠包含多個(gè)孔和通道，分子根據(jù)其直徑穿過(guò),。半徑小的分子穿過(guò)柱子的孔遷移需要較長(zhǎng)的時(shí)間,，而大分子則較早地從柱子上洗脫下來(lái)。SEC可精確分離大分子和小分子,。與離心分離方法相比,，SEC分離的外泌體不受剪切力的影響，剪切力可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu),。此方法分離到的外泌體純度較高,，在電鏡下大小均一，但是獲取量少,，所需設(shè)備特殊,。此外，SEC方法與超濾相結(jié)合已被用于尿液來(lái)源的外泌體的分離和分析,。

外泌體的生物發(fā)生和鑒定,。液體和細(xì)胞外成分，如蛋白質(zhì),、脂類,、代謝物、小分子和離子,，可以通過(guò)內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷,，與細(xì)胞表面蛋白一起進(jìn)入細(xì)胞。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向,。這一出芽過(guò)程導(dǎo)致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER),、跨高爾基網(wǎng)絡(luò)(TGN)和線粒體預(yù)先形成的早期核內(nèi)體融合。ESEs也可以與ER和TGN融合，這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達(dá)它們的,。因此,，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源,。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白,、免疫調(diào)節(jié)蛋白等,。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白,、RNA,、DNA、氨基酸和代謝物,。外泌體的提取的方式：免疫磁珠法,。

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子）以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì),，在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移,、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過(guò)程,，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,，使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)，另一方面也可以作為診療手段,，未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療,。外泌體研究，應(yīng)選用血漿還是血清,？答：血清是血液凝固之后收集的液體,，所以其中少了纖維蛋白原，凝血因子,，以及多了比較多凝血產(chǎn)物,。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，具有凝血功能,。在凝血過(guò)程中血小板會(huì)分泌大量的外泌體,，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來(lái)自額外的分泌。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合,。外泌體可以通過(guò)多種方法給藥，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。外泌體mirna提取試劑盒推薦

磁珠免疫法分離的外泌體,，生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及,。上海外泌體tmt

外泌體的提取分離方法：1,、PEG-base沉淀法：聚乙二醇可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體,，其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽(yáng)性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。2,、試劑盒提?。航鼛啄陙?lái)，市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過(guò)特殊設(shè)計(jì)的過(guò)濾器過(guò)濾掉雜質(zhì)成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái),。上海外泌體tmt

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