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外泌體檢測(cè)優(yōu)勢(shì)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-02-24

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子,、生長(zhǎng)因子)以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移,、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過(guò)程,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),,另一方面也可以作為診療手段,,未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究,,應(yīng)選用血漿還是血清?答:血清是血液凝固之后收集的液體,,所以其中少了纖維蛋白原,,凝血因子,以及多了比較多凝血產(chǎn)物,。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,,具有凝血功能。在凝血過(guò)程中血小板會(huì)分泌大量的外泌體,,有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來(lái)自額外的分泌,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。外泌體檢測(cè)優(yōu)勢(shì)

外泌體檢測(cè)優(yōu)勢(shì),外泌體提取試劑盒

外泌體的相關(guān)成分:1,、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,,是磷脂雙分子層。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,,能綁定特異性的肽鏈,。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins,、RAN、GTPases,。5,、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide,、SM,、PC,限制膜流動(dòng),,參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6,、外泌體中含有核酸,包括miRNA,、DNA,、lncRNA、mRNA,;同時(shí)還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral,、ARF6、PLD2,、RAB家族,。8、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),,進(jìn)行主動(dòng)包埋,。外泌體的膜同細(xì)胞一樣,是磷脂雙分子層,。細(xì)胞外泌體熒光標(biāo)記采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高,,外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響。

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外泌體的生物發(fā)生和鑒定,。液體和細(xì)胞外成分,,如蛋白質(zhì),、脂類、代謝物,、小分子和離子,,可以通過(guò)內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷,與細(xì)胞表面蛋白一起進(jìn)入細(xì)胞,。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向,。這一出芽過(guò)程導(dǎo)致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)、跨高爾基網(wǎng)絡(luò)(TGN)和線粒體預(yù)先形成的早期核內(nèi)體融合,。ESEs也可以與ER和TGN融合,,這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達(dá)它們的。因此,,一些ESEs可以包含膜和腔的成分,,可以表示不同的起源。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白,、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白,、細(xì)胞內(nèi)蛋白,、RNA、DNA,、氨基酸和代謝物,。

AFC自動(dòng)收集器是將qEV分離法這一過(guò)程自動(dòng)化的儀器,將用來(lái)收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi),,根據(jù)稱重精確測(cè)量流體體積,,可精確的測(cè)量到樣品中每一個(gè)液滴的重量并精確測(cè)量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨(dú)中心孔中并送至廢液桶,,避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中,。在提取期間,當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后,,轉(zhuǎn)盤會(huì)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)到下一個(gè)微量離心管繼續(xù)收集,到收集完成后自動(dòng)停止,。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率,,而且由于采用微滴計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行定量,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號(hào)和Ct值,,對(duì)所測(cè)樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量,。從研究上來(lái)講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用,,活躍細(xì)胞內(nèi)通路,。

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外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體,,是具有生物活性的脂雙層囊泡,大小約為30-100nm,,由不同類型的正常細(xì)胞和瘤子細(xì)胞自然產(chǎn)生和釋放,。這些囊泡在細(xì)胞間通訊中起重要作用,并影響細(xì)胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng),。外泌體通過(guò)內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。外泌體貨物的組成非常多樣化,,包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白,、趨化因子、細(xì)胞因子,、細(xì)胞受體,、脂質(zhì)以及不同的核酸,如miRNA和環(huán)狀RNA,。外泌體可以通過(guò)多種方法給藥,,靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。外泌體的直徑比微泡的要小,,后者直徑為100nm-1μm,。體液外泌體提取試劑盒服務(wù)

外泌體存在于組織樣本中,如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等。外泌體檢測(cè)優(yōu)勢(shì)

免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合,。首先對(duì)樣品進(jìn)行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性,變性后,,通過(guò)SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),,然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上并暴露于針對(duì)目的抗原的抗體中??贵w特異性識(shí)別膜表面上的抗原,,然后將膜暴露于第二抗體中。通過(guò)二抗的熒光標(biāo)簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶基團(tuán)進(jìn)行檢測(cè),。常用的標(biāo)記蛋白為CD63,、CD81、TSG101和ALIX等,。但是此方法的特異性和重復(fù)性會(huì)受到所用抗體質(zhì)量的限制,。外泌體檢測(cè)優(yōu)勢(shì)

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