NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單,、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,，用激光光束穿過(guò)樣本，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,，通過(guò)裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,，捕捉外泌體的布朗運(yùn)動(dòng)，實(shí)現(xiàn)顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來(lái)測(cè)量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小,。NTA能夠測(cè)量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體，因此無(wú)法排除其他物質(zhì)的干擾,。外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成。浙江外泌體iTRAQ

超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn),，主要是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù),、大小和形狀將其分離出來(lái)。首先4℃低速離心（300-500g,，10min）去除死細(xì)胞以及細(xì)胞碎片,，隨后以較高離心速度(2000xg，10min)去除生物聚合物以及凋亡小體,，然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡,，結(jié)尾以超速離心沉淀外泌體。通過(guò)懸浮以及重復(fù)超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白,。超速離心法具有操作簡(jiǎn)單,、不易被分離試劑污染、獲得的外泌體數(shù)量較多等優(yōu)點(diǎn)。但是此方法需要昂貴的超高速離心機(jī),，每次處理的樣本量較小,，費(fèi)時(shí)，電鏡鑒定時(shí)還發(fā)現(xiàn)外泌體易聚集成塊,，且上清中仍能檢測(cè)到大型囊泡,，純度不高，另外高速離心會(huì)損傷外泌體影響下游實(shí)驗(yàn),。細(xì)胞外泌體Dir從研究上來(lái)講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡,。

外泌體的臨床應(yīng)用：間充質(zhì)干細(xì)胞是目前較普遍使用的細(xì)胞類型，它具有自我更新,，多向分化,、分泌細(xì)胞因子和細(xì)胞外囊泡體、免疫調(diào)節(jié),、來(lái)源普遍等特點(diǎn)，在臨床診療中取得了良好的成果,。間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體與間充質(zhì)干細(xì)胞有著相似的功能,，包括修復(fù)與再生組織、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫,，但外泌體相對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞又有許多優(yōu)勢(shì),。首先，間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體更穩(wěn)定,，更好保存,，易于管理和控制，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量,。其次,，它們沒(méi)有活細(xì)胞，不會(huì)像間充質(zhì)干細(xì)胞那樣可能會(huì)過(guò)多增殖而放大療效或者病變導(dǎo)致疾病加重,；另外,，它有可能避免某些針對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控問(wèn)題，間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體有代替間充質(zhì)干細(xì)胞的趨勢(shì),。干細(xì)胞外泌體攝取流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升。

外泌體的提取,、純化和鑒定：每一個(gè)外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過(guò)形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì),，且能靶向特定細(xì)胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞和瘤子細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放。

近年來(lái),，外泌體的捕獲技術(shù)越來(lái)越多,，微流體系也被用于外泌體提取，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體,。采用這種方法獲得的樣品純度高,，且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè)。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,，并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜，所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長(zhǎng)度,。另外,，樣品量的注入速率比較低，因此,，對(duì)于大樣品量,，將需要較長(zhǎng)的處理時(shí)間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能,。目前,，研究人員已開發(fā)了多種方法來(lái)分離外泌體，離心技術(shù)仍然是常用方法,，其他方法,，例如過(guò)濾、磁珠分離和色譜法等,，也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),，但目前仍然沒(méi)有一種公認(rèn)有效的提取方法，研究人員應(yīng)針對(duì)不同來(lái)源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案,。外泌體的提取的方式：超速離心法,。北京外泌體label free

外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,，調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng)。浙江外泌體iTRAQ

外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1,、2、4,、5,、6、7,、11等）,。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細(xì)胞來(lái)源）,、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源),、CD86(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細(xì)胞）。外泌體的提取的方式：超速離心法,。浙江外泌體iTRAQ

上海宇玫博生物科技有限公司在同行業(yè)領(lǐng)域中，一直處在一個(gè)不斷銳意進(jìn)取,，不斷制造創(chuàng)新的市場(chǎng)高度,，多年以來(lái)致力于發(fā)展富有創(chuàng)新價(jià)值理念的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)，在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中始終保持良好的商業(yè)口碑,，成績(jī)讓我們喜悅,，但不會(huì)讓我們止步，殘酷的市場(chǎng)磨煉了我們堅(jiān)強(qiáng)不屈的意志,，和諧溫馨的工作環(huán)境,，富有營(yíng)養(yǎng)的公司土壤滋養(yǎng)著我們不斷開拓創(chuàng)新，勇于進(jìn)取的無(wú)限潛力,，上海宇玫博生物科技供應(yīng)攜手大家一起走向共同輝煌的未來(lái),，回首過(guò)去，我們不會(huì)因?yàn)槿〉昧艘稽c(diǎn)點(diǎn)成績(jī)而沾沾自喜,，相反的是面對(duì)競(jìng)爭(zhēng)越來(lái)越激烈的市場(chǎng)氛圍,，我們更要明確自己的不足，做好迎接新挑戰(zhàn)的準(zhǔn)備,，要不畏困難,，激流勇進(jìn),，以一個(gè)更嶄新的精神面貌迎接大家，共同走向輝煌回來(lái),！