外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學特性,，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用,。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力,。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道,，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復雜貨物的組成?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預后方面具有潛在的應(yīng)用價值,。疾病的進展和對診療的反應(yīng)也可以通過外泌體的多組分分析來確定的。從研究上來講并不太嚴格區(qū)分外泌體或微泡。外泌體超濾濃縮

外泌體的相關(guān)成分：1,、外泌體的膜同細胞一樣,，是磷脂雙分子層。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,，能綁定特異性的肽鏈。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins、RAN,、GTPases,。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide,、SM、PC,，限制膜流動,，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6、外泌體中含有核酸,，包括miRNA,、DNA、lncRNA,、mRNA,；同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中,。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6,、PLD2,、RAB家族。8,、一些物質(zhì)進行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU）,，進行主動包埋,。海洋生物外泌體質(zhì)譜免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合,。

外泌體的提取分離方法：1,、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。2,、試劑盒提取：近幾年來,，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。

被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉(zhuǎn)移準備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細胞重新定向,。外泌體的蛋白質(zhì)組學分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達譜,，整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān)，而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān),。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取,，進而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達,。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預測肉瘤轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標,。外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸,、誘導正常細胞轉(zhuǎn)化,、促進瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用。

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評估外泌體形態(tài),、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,，該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,，捕獲并檢測散射的電子,，從而生成粒子圖像。但是,，在TEM中,，不與粒子相互作用的電子穿過樣品，并使用熒光屏進行檢測,。電子顯微鏡下外泌體大小不一,，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高,，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響,；另外樣品的準備階段比較復雜，不適合進行大量快速的測量,；而且由于樣本經(jīng)過了干燥,、固定以及冷凍等預處理和制備過程，對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞,，從而影響觀察的效果,，無法準確測量外泌體濃度。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,，生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。外泌體天然存在于體液中,，包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。植物外泌體PKH26

外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA。外泌體超濾濃縮

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1,、免疫磁珠法,，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高,、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,，不便進行下一步的實驗,。2,、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合,，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整,，純度較高,。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性,，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。3、色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍,。外泌體超濾濃縮

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