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外泌體超濾濃縮

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-02-26

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性,,它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用,。除了它們的診療潛力,外泌體也有幫助疾病診斷的潛力,。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報(bào)道,,并且通過(guò)生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成,?;谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。疾病的進(jìn)展和對(duì)診療的反應(yīng)也可以通過(guò)外泌體的多組分分析來(lái)確定的,。從研究上來(lái)講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡,。外泌體超濾濃縮

外泌體超濾濃縮,外泌體提取試劑盒

外泌體的相關(guān)成分:1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,,是磷脂雙分子層,。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,,能綁定特異性的肽鏈,。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins,、RAN、GTPases,。5,、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide、SM,、PC,,限制膜流動(dòng),參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6,、外泌體中含有核酸,,包括miRNA、DNA,、lncRNA,、mRNA;同時(shí)還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中,。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral,、ARF6,、PLD2、RAB家族,。8,、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進(jìn)行主動(dòng)包埋,。海洋生物外泌體質(zhì)譜免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。

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外泌體的提取分離方法:1,、PEG-base沉淀法:聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體,,其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),,顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,,因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑,。2、試劑盒提?。航鼛啄陙?lái),,市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,,有的是通過(guò)特殊設(shè)計(jì)的過(guò)濾器過(guò)濾掉雜質(zhì)成分,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái),。

被特定部位的細(xì)胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細(xì)胞重新定向,。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達(dá)譜,,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān),。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取,,進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá),。通過(guò)臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測(cè)肉瘤轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo),。外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化,、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用。

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透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評(píng)估外泌體形態(tài),、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,,該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測(cè)電子類別,在SEM中,,電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,,捕獲并檢測(cè)散射的電子,從而生成粒子圖像,。但是,在TEM中,,不與粒子相互作用的電子穿過(guò)樣品,,并使用熒光屏進(jìn)行檢測(cè)。電子顯微鏡下外泌體大小不一,,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響,;另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,,不適合進(jìn)行大量快速的測(cè)量;而且由于樣本經(jīng)過(guò)了干燥,、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過(guò)程,,對(duì)生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞,,從而影響觀察的效果,無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量外泌體濃度,。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,,生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),,難以普遍普及,。外泌體天然存在于體液中,包括血液,、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。植物外泌體PKH26

外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA,。外泌體超濾濃縮

外泌體的提取主要包括以下幾種方式:1,、免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,,特異性高,、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性,,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。2,、PS親和法,,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度較高,。由于不使用變性劑,,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。3,、色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,,應(yīng)用不普遍。外泌體超濾濃縮

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