外泌體的臨床應(yīng)用：間充質(zhì)干細(xì)胞是目前較普遍使用的細(xì)胞類型,，它具有自我更新，多向分化,、分泌細(xì)胞因子和細(xì)胞外囊泡體,、免疫調(diào)節(jié)、來源普遍等特點,，在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果,。間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體與間充質(zhì)干細(xì)胞有著相似的功能,，包括修復(fù)與再生組織,、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，但外泌體相對于間充質(zhì)干細(xì)胞又有許多優(yōu)勢,。首先,，間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體更穩(wěn)定，更好保存,，易于管理和控制,，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量。其次,，它們沒有活細(xì)胞,，不會像間充質(zhì)干細(xì)胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導(dǎo)致疾病加重；另外,，它有可能避免某些針對間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控問題,，間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體有代替間充質(zhì)干細(xì)胞的趨勢。外泌體可以通過多種方法給藥，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。植物外泌體測序

細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細(xì)胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì)、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子。近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。乳液提取試劑盒銷售外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞,。

外泌體生物學(xué)功能：1,、在心血管系統(tǒng)中，據(jù)報道,，源自人胚胎干細(xì)胞（ESC）的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷,；2、在免疫系統(tǒng)中,，據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制,；3、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中,，外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動,，從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理；迄今為止,，尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細(xì)胞結(jié)合的途徑,。然而，比較明顯，其結(jié)合過程從外泌體識別受體細(xì)胞PM上的特定受體開始,。膜受體的識別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),，它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍，外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細(xì)胞中,。從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。

流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,，可用流式細(xì)胞儀檢測到陽性表達(dá),，從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液,，當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導(dǎo)致一次觀察到多個顆粒,，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。因此,，為了通過流式細(xì)胞儀觀察,，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結(jié)合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細(xì)胞術(shù)之前,，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當(dāng)樣品通過流式細(xì)胞儀時采集熒光信號,，不只可以對外泌體進(jìn)行高通量分析,，還可以基于抗原表達(dá)對外泌體進(jìn)行定量或分類。外泌體可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送,。

當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源,、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸,、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能,。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈,、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化、肉瘤侵襲等方方面面,。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了肉瘤的生長與侵襲。外泌體的數(shù)量：人體中大約有1014個,，近乎于平均每個細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個,。福建鼻腔灌洗液外泌體

利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。植物外泌體測序

PEG沉淀法分離外泌體：通常通過將無水聚合物,，如聚乙二醇（PEG）,，與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結(jié)合水分子,，增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體,，然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速,，簡便,，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設(shè)定。然而,，這種方法缺乏選擇性,，PEG聚合物不只會導(dǎo)致外泌體小泡沉淀，還會引起其他細(xì)胞外囊泡,、細(xì)胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀,。因此，在使用這種方法之前,，必須進(jìn)行樣品預(yù)處理,，例如過濾或超速離心，以減少較終的外泌體制劑的污染,。植物外泌體測序

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