HE染色注意事項:1,、染色時調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,,組織酸化而影響細(xì)胞核著色,。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,,這樣可以使細(xì)胞核著色較深,。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸,。2,、切片染蘇木精后,分色這一步是關(guān)鍵,,應(yīng)在顯微鏡下控制進行,,一般以細(xì)胞核染色清楚(晰)而細(xì)胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導(dǎo)致染色太淺,,應(yīng)重新染色后再行分色,。3、切片經(jīng)酒精脫水后,,入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài),,此為脫水不徹底,應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精,,更換酒精,、二甲苯,以求徹底脫水與透明,。4,、在染色過程中不要讓切片干燥,以免切片收縮,、變形,,影響神經(jīng)元形態(tài)。5,、切片從二甲苯取出或進入二甲苯前,,切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。6,、***封固時,,要用中性樹脂,防止日后褪色,,蓋片要選大于組織塊的面積,,如漏出一部分不久將會褪色,所用樹脂濃度要適當(dāng),,樹脂封固時不能有氣泡,。什么是HE染色,HE染色實驗的目的,。山西質(zhì)量好的HE染色價格
HE染色反藍(lán)的原理:蘇木素染液,,細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條鏈上的磷酸基向外,,帶負(fù)電荷,,呈酸性,,很容易與帶正電荷的蘇木素精堿性染料以離子或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色,。 分化:蘇木素染色之后,用水洗去未結(jié)合在細(xì)胞上的染液,,但是在細(xì)胞核中結(jié)合過多的染料和細(xì)胞漿中吸附的染料必須用分化液1%鹽酸酒精脫去,,才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色的分明,把這個過程稱為染色的分化作用,。因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),,使色素與組織解離,分化不可過度,。藍(lán)化:分化之后蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),,在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),而呈藍(lán)色,,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,,再用弱堿性水使蘇木精染上的細(xì)胞核變呈藍(lán)色,稱藍(lán)化作用,,一般多用自來水浸洗即可變藍(lán),,也可用溫水(50度溫水比較好)變藍(lán)。新疆結(jié)果客觀的HE染色價格關(guān)于HE染色,,常用的結(jié)果分析原理,。
HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項:多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸,使溶液pH降低,,從而影響染色,。不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間,。多聚甲醛雖然作用溫和,,但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,,切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過24小時。多聚甲醛可長期存在于固定過的細(xì)胞或組織樣品中,,固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時仍會有殘留,,因此后續(xù)實驗結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛,。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,,使之不能充分暴露,,可造成假陰性的染色,,影響免疫組化結(jié)果。因此,,4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,,有時需要對抗原先進行修復(fù),,然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作,。
HE染色堿染料染主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著色。學(xué)上常用的一種染色方法為蘇木精 伊紅染色法,。蘇木精 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,,簡稱HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 ,。蘇木精染液為堿 ,,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸染料 ,,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 ,。細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì),、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,,胞漿內(nèi)嗜酸顆粒呈強的鮮紅色,。膠原纖維呈淡粉紅色,力纖維呈亮粉紅色,,紅血球呈橘紅色,,蛋白液體呈粉紅色。HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化,。
HE染色不管怎么操作,,始終無法染色或淡染答:這種情況一般因為組織固定時采用了酸性甲醛;或者組織在甲醛中浸泡時間太長;或者久置的甲醛變性分解為甲酸。補救:防患于未然,,要么使用新鮮的中性甲醛固定,,要么在存放的甲醛中加一點碳酸鈉中和甲酸。對于已經(jīng)固定的組織可考慮再次固定,;對于已經(jīng)制出的片子,,染色前采用5%重鉻酸鉀溶液浸泡半小時以上,然后自來水漂洗5min,,可改善染色,。也可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中,補充染色媒介,,增強蘇木素與組織的親和力(蘇木素染色必須要媒介才能染上,,單純的蘇木素與組織的親和力很弱),。科研常備實驗操作之HE染色,。廣西質(zhì)量好的HE染色
比較基礎(chǔ)的病理染色HE染色,。山西質(zhì)量好的HE染色價格
HE染色法,,。蘇木精染液為堿 ,,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸染料 ,,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色,。而線粒體用HE染色不可見,活細(xì)胞通常要求活細(xì)胞近似無色線粒體需要用健那綠來染色,,再在高倍鏡下觀察,。從人或動物新鮮尸體上取下塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使,、細(xì)胞的蛋白質(zhì)變凝固,,以防止細(xì)胞后的自溶或細(xì)菌的分解,從而保持細(xì)胞本來的形態(tài)結(jié)構(gòu),。一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,,逐漸脫去塊中的水份。再將塊置于既溶于酒精,,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,,以二甲苯替換出塊的中酒精,才能浸蠟包埋,。山西質(zhì)量好的HE染色價格