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磁珠分選出小膠質(zhì)細(xì)胞源性外泌體

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-05

近年來,,外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體,。采用這種方法獲得的樣品純度高,,且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè),。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,,所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長(zhǎng)度。另外,,樣品量的注入速率比較低,,因此,對(duì)于大樣品量,,將需要較長(zhǎng)的處理時(shí)間,。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能。目前,,研究人員已經(jīng)開發(fā)了多種方法來分離外泌體,,離心技術(shù)仍然是常用方法,其他方法,,例如過濾,、磁珠分離和色譜法等,也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),,但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法,,研究人員應(yīng)針對(duì)不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測(cè)腫細(xì)胞轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。磁珠分選出小膠質(zhì)細(xì)胞源性外泌體

磁珠分選出小膠質(zhì)細(xì)胞源性外泌體,外泌體提取試劑盒

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子,、生長(zhǎng)因子)以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移,、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),,另一方面也可以作為診療手段,,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究,,應(yīng)選用血漿還是血清,?答:血清是血液凝固之后收集的液體,所以其中少了纖維蛋白原,,凝血因子,,以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,,具有凝血功能,。在凝血過程中血小板會(huì)分泌大量的外泌體,有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌,。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。細(xì)胞外泌體label free在免疫系統(tǒng)中,,據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制,。

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密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,,目前普遍應(yīng)用的是蔗糖,,這種方法可以成功地將亞細(xì)胞成分(例如過氧化物酶體,線粒體和核內(nèi)體)分離到密度梯度溶液中的不同層中,。樣品被放置在梯度的頂部,,當(dāng)施加離心力時(shí),樣品中的顆粒以獨(dú)特的速率通過梯度,,該梯度以從上到下的密度增加,。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,隨后可以通過分餾收集,,密度梯度超速離心對(duì)從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效,。此方法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣、費(fèi)時(shí)且會(huì)造成外泌體損失,。

流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,,其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63,、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,,可用流式細(xì)胞儀檢測(cè)到陽性表達(dá),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體的定量,。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)時(shí)需要單顆粒懸浮液,,當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒,從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,。因此,,為了通過流式細(xì)胞儀觀察,需要將外泌體通過免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上,,從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細(xì)胞術(shù)之前,,可在落射熒光顯微鏡(EPI)下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當(dāng)樣品通過流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號(hào),不只可以對(duì)外泌體進(jìn)行高通量分析,,還可以基于抗原表達(dá)對(duì)外泌體進(jìn)行定量或分類,。外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體。

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外泌體是包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30–150nm),,由所有體外和體內(nèi)細(xì)胞持續(xù)分泌,。由于人體內(nèi)復(fù)雜的功能,包括細(xì)胞間通訊和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),,外泌體正在改變研究,。這些細(xì)胞外囊泡正在生長(zhǎng),這既是為了了解其生物學(xué)功能,,也是為了將其用于實(shí)際應(yīng)用,,如無創(chuàng)診斷和高級(jí)調(diào)理開發(fā)。Dynabeads提供一系列外泌體分離產(chǎn)品和工具,,用于表征和分析其RNA和蛋白質(zhì)含量,,以及體外和體內(nèi)追蹤,以幫助您進(jìn)一步了解這些迷人的外泌體,。超速離心方案可能冗長(zhǎng)乏味且耗時(shí)的,。您可使用靈活且可擴(kuò)展的總外泌體分離試劑從細(xì)胞培養(yǎng)基或任何體液中即刻分離完整的外泌體。這些試劑及其隨附的方案是多種試驗(yàn)的理想選擇,,包括處理少量樣本和處理多個(gè)樣本,。外泌體的提取的方式:PS親和法,。人民網(wǎng)外泌體

外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,。磁珠分選出小膠質(zhì)細(xì)胞源性外泌體

外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體,,是具有生物活性的脂雙層囊泡,大小約為30-100nm,,由不同類型的正常細(xì)胞和瘤子細(xì)胞自然產(chǎn)生和釋放,。這些囊泡在細(xì)胞間通訊中起重要作用,并影響細(xì)胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng),。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。外泌體貨物的組成非常多樣化,,包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白,、趨化因子、細(xì)胞因子,、細(xì)胞受體,、脂質(zhì)以及不同的核酸,如miRNA和環(huán)狀RNA,。外泌體可以通過多種方法給藥,,靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。磁珠分選出小膠質(zhì)細(xì)胞源性外泌體

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標(biāo)簽: 外泌體提取試劑盒