胞外囊泡和外泌體的異質(zhì)性,。細(xì)胞外囊泡的兩大類是胞外體和外泌體,。胞外體通過質(zhì)膜出芽釋放，大小在50~1mm之間,。外泌體起源于內(nèi)泌體途徑,，通過形成包含ILVs的ESEs,、LSEs，較終形成多泡體,。當(dāng)MVBs與質(zhì)膜融合時,，外泌體釋放(尺寸范圍~40~160nm)。外泌體是一個高度異質(zhì)性的群體,，具有獨特的誘導(dǎo)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的能力,。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物),、對受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來概念化,。這些特征的不同組合導(dǎo)致了外泌體的復(fù)雜異質(zhì)性。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。安徽外泌體熒光標(biāo)記

外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障（如細(xì)胞質(zhì)膜和血/腦屏障）的能力,。這使它們成為理想的診療傳遞分子,。外泌體由于其天然的材料運(yùn)輸特性，固有的長期循環(huán)能力和出色的生物相容性而具有比較大的潛力成為藥物遞送載體,，其適合于遞送各種化學(xué)物質(zhì),，蛋白質(zhì)，核酸和基因診療劑,。（1）外泌體作為小分子的藥物傳遞載體：關(guān)于外泌體遞送姜黃素,，多巴胺，PTX和DOX等化學(xué)診療藥物的報道已有充分文獻(xiàn)記載,。（2）外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體：已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體可遞送多種蛋白質(zhì),，例如酶，細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)和跨膜蛋白質(zhì),。（3）外泌體作為核酸的藥物遞送載體：研究表明,，外泌體天然的可以攜帶遺傳（例如miRNA，siRNA）到靶細(xì)胞中,，從而在生物學(xué)和致病過程中誘導(dǎo)遺傳修飾,。外泌體的這些特征已成為涉及遺傳療法和使用外泌體進(jìn)行研究的主要策略。血漿血清提取試劑盒價格提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）,、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實現(xiàn)的,。

外泌體分離的主要挑戰(zhàn)之一是消除納米級污染物，包括干擾外泌體標(biāo)志物解析的游離核酸和脂蛋白。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。盡管如此,，它仍難以符合臨床應(yīng)用所需的標(biāo)準(zhǔn)，主要是由于該方法得到的外泌體純度不足,，產(chǎn)量較低,，完整性欠佳且分離純化操作耗時長。其他方法,，例如基于聚乙二醇（PEG）的沉淀,，磷脂酰絲氨酸親和捕獲，尺寸排阻色譜法和膜親和捕獲,，近年來已經(jīng)出現(xiàn)在特定的應(yīng)用中,，但是只適用于特定場景。近來,，非對稱流場-流分離方法已被用于從細(xì)胞和瘤子培養(yǎng)基中高分辨率地分選EV亞群,，但其通量受到繁瑣的樣品制備程序的影響。單一分析耗時的過程也限制了其普遍的應(yīng)用,。因此,，目前亟需開發(fā)創(chuàng)新技術(shù)以提高外泌體分離純化的效率，純度,，產(chǎn)量,，速度和耐用性?；诔瑸V的技術(shù)提供了潛在的有前途的替代方法,，但它們也有缺點。在切向流過濾中,，使進(jìn)料流平行于多孔膜流動,，以避免堵塞。然而,，盡管已實現(xiàn)使用切向流過濾從大量條件細(xì)胞培養(yǎng)基中濃縮外泌體,，但受制于其一次性模塊的成本高，高剪切應(yīng)力,，難以處理小體積樣品等因素而難以應(yīng)用于臨床分析,。

細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體,、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細(xì)胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì),、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。外泌體的提取的方式：色譜法,。

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,，主要由微囊泡、凋亡小體,、外泌體組成,。而外泌體是其中一類小囊泡，直徑為30~150nm,，密度1.10~1.18g/ml,，可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,，存在于血液,、唾液、尿液等多種體液中,。越來越多的研究證實,，外泌體可以通過細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì),、脂質(zhì)等特定物質(zhì),，發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中,、腫細(xì)胞細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展,、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷,、療效評價和預(yù)后分析,。外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性,。外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而活躍細(xì)胞內(nèi)的信號通路,。廣州外泌體Dil

電子顯微鏡下外泌體大小不一,，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。安徽外泌體熒光標(biāo)記

外泌體的提取分離方法：1,、超濾離心：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離,，便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法,。2、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63,、CD9蛋白）,，用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高,、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗,，難以普遍普及,。安徽外泌體熒光標(biāo)記

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