外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障（如細胞質(zhì)膜和血/腦屏障）的能力,。這使它們成為理想的診療傳遞分子,。外泌體由于其天然的材料運輸特性，固有的長期循環(huán)能力和出色的生物相容性而具有比較大的潛力成為藥物遞送載體,，其適合于遞送各種化學物質(zhì),，蛋白質(zhì)，核酸和基因診療劑,。（1）外泌體作為小分子的藥物傳遞載體：關(guān)于外泌體遞送姜黃素,，多巴胺，PTX和DOX等化學診療藥物的報道已有充分文獻記載,。（2）外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體：已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體可遞送多種蛋白質(zhì),，例如酶，細胞骨架蛋白質(zhì)和跨膜蛋白質(zhì),。（3）外泌體作為核酸的藥物遞送載體：研究表明,，外泌體天然的可以攜帶遺傳（例如miRNA，siRNA）到靶細胞中,，從而在生物學和致病過程中誘導(dǎo)遺傳修飾,。外泌體的這些特征已成為涉及遺傳療法和使用外泌體進行研究的主要策略。外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體,，因此無法排除其他物質(zhì)干擾。湖北外泌體label free

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體，主要由微囊泡,、凋亡小體,、外泌體組成。而外泌體是其中一類小囊泡,，直徑為30~150nm,，密度1.10~1.18g/ml，可攜帶核酸,、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,，存在于血液、唾液,、尿液等多種體液中,。越來越多的研究證實，外泌體可以通過細胞間轉(zhuǎn)移核酸,、蛋白質(zhì),、脂質(zhì)等特定物質(zhì)，發(fā)揮特殊的功能,。如在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中,、腫細胞細胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷,、療效評價和預(yù)后分析。血漿外泌體質(zhì)譜外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運至靶細胞,。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1、免疫磁珠法,，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備,，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗,。2,、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合,，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整,，純度較高,。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。3,、色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不普遍。

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單,、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,，捕捉外泌體的布朗運動，實現(xiàn)顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小,。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體，因此無法排除其他物質(zhì)干擾,。外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。

尺寸排阻色譜法（SEC）根據(jù)大小來分離樣本,。該技術(shù)應(yīng)用了一個裝有多孔聚合物珠的色譜柱，該聚合物珠包含多個孔和通道,，分子根據(jù)其直徑穿過,。半徑小的分子穿過柱子的孔遷移需要較長的時間，而大分子則較早地從柱子上洗脫下來,。SEC可精確分離大分子和小分子,。與離心分離方法相比，SEC分離的外泌體不受剪切力的影響,，剪切力可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu),。此方法分離到的外泌體純度較高，在電鏡下大小均一，但是獲取量少,，所需設(shè)備特殊,。此外，SEC方法與超濾相結(jié)合已被用于尿液來源的外泌體的分離和分析,。超離法是較常用的外泌體純化手段,。體液外泌體測序

需要開發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術(shù)和策略。湖北外泌體label free

外泌體遞送藥物的優(yōu)勢：許多新的候選藥物（例如蛋白質(zhì)和核酸）在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定,，對診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn),。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問題，外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子,。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產(chǎn)物,，通過外泌體遞送藥物可以避免巨噬細胞的吞噬作用或降解，還可以在體內(nèi)長時間循環(huán),，保持效果,。其中，外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經(jīng)系統(tǒng)是外泌體遞送藥物的一個明顯優(yōu)勢,。湖北外泌體label free

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