外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,，通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成,，其大小均一,，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質干細胞,、淋巴細胞和肉瘤細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內主要含有核酸,、蛋白質和脂質等,，可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能,、參與細胞生物學活動等,。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生；骨髓間充質干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調節(jié)成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體研究使用血漿樣本進行實驗較好,。湖南鼻腔灌洗液外泌體

外泌體生物學功能：1、在心血管系統(tǒng)中,，據報道,，源自人胚胎干細胞（ESC）的間充質干細胞（MSC）外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷；2,、在免疫系統(tǒng)中,，據報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制；3,、在中樞的神經系統(tǒng)中,，外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動，從而阻止神經退行性疾病的發(fā)病機理,；迄今為止,，尚未完全發(fā)現(xiàn)調節(jié)外泌體-細胞結合的途徑。然而,，比較明顯,，其結合過程從外泌體識別受體細胞PM上的特定受體開始。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎,，它可能活躍受體并隨后導致相關信號通路的活躍,，外泌體與PM融合或外泌體的內吞作用，從而導致蛋白質和RNA直接釋放到受體細胞中,。廣州外泌體透射電鏡檢測外泌體的納米球膜型結構由雙層脂質形成,。

超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認為是金標準，主要是根據外泌體的沉降系數,、大小和形狀將其分離出來,。首先4℃低速離心（300-500g，10min）去除死細胞以及細胞碎片，隨后以較高離心速度(2000xg,，10min)去除生物聚合物以及凋亡小體,，然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡，結尾以超速離心沉淀外泌體,。通過懸浮以及重復超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白,。超速離心法具有操作簡單、不易被分離試劑污染,、獲得的外泌體數量較多等優(yōu)點,。但是此方法需要昂貴的超高速離心機，每次處理的樣本量較小,，費時，電鏡鑒定時還發(fā)現(xiàn)外泌體易聚集成塊,，且上清中仍能檢測到大型囊泡,，純度不高，另外高速離心會損傷外泌體影響下游實驗,。

超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認為是金標準,，主要是根據外泌體的沉降系數、大小和形狀將其分離出來,。首先4℃低速離心（300-500g,，10min）去除死細胞以及細胞碎片，隨后以較高離心速度(2000xg,，10min)去除生物聚合物以及凋亡小體,，然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡，結尾以超速離心沉淀外泌體,。通過懸浮以及重復超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白,。超速離心法具有操作簡單、不易被分離試劑污染,、獲得的外泌體數量較多等優(yōu)點,。但是此方法需要昂貴的超高速離心機，每次處理的樣本量較小,，費時,，電鏡鑒定時還發(fā)現(xiàn)外泌體易聚集成塊，且上清中仍能檢測到大型囊泡,，純度不高,，另外高速離心會損傷外泌體影響下游實驗。外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉運至靶細胞,。外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性,。

為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀,？答：這種問題通常有三種可能性，其一：使用的細胞上清或者血清量太低,，從而造成了這樣的結果,。其二：使用了不透明的超速離心管，一般來說外泌體產量都比較小,，所以凡是不透明的管子,，基本都是比較難見到明顯沉淀的，可以當做有沉淀,，然后操作下去即可,。其三：使用了角轉。部分品牌離心機的角轉管壁粘附性比較低,，超離結束沒多久沉淀就會滑落下去,，所以請在離心結束時趕緊去收樣。外泌體的角色：1,、外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,，活躍細胞內通路。2,、外泌體的角色之一：細胞-細胞通訊,，比如抗原遞呈。外泌體提取在短時間（一周之內）使用,，可以放在4度保存,，如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。外泌體是什么提取的

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,，包括內皮細胞,、免疫細胞、血小板,、平滑肌細胞等,。湖南鼻腔灌洗液外泌體

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,，早先應用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質疑。2,、試劑盒提?。航鼛啄陙恚袌錾弦殉霈F(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。湖南鼻腔灌洗液外泌體

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