透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評(píng)估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見(jiàn)的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,，該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測(cè)電子類別，在SEM中,，電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射，捕獲并檢測(cè)散射的電子,，從而生成粒子圖像,。但是，在TEM中,，不與粒子相互作用的電子穿過(guò)樣品,，并使用熒光屏進(jìn)行檢測(cè)。電子顯微鏡下外泌體大小不一,，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響,；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,，不適合進(jìn)行大量快速的測(cè)量；而且由于樣本經(jīng)過(guò)了干燥,、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過(guò)程,，對(duì)生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞，從而影響觀察的效果,，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量外泌體濃度,。外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6,、PLD2,、RAB家族。外泌體機(jī)制研究套路

流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63,、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記，可用流式細(xì)胞儀檢測(cè)到陽(yáng)性表達(dá),，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體的定量,。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)時(shí)需要單顆粒懸浮液，當(dāng)外泌體濃度高或分離過(guò)程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒,，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,。因此，為了通過(guò)流式細(xì)胞儀觀察,，需要將外泌體通過(guò)免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細(xì)胞術(shù)之前,，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當(dāng)樣品通過(guò)流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號(hào)，不只可以對(duì)外泌體進(jìn)行高通量分析,，還可以基于抗原表達(dá)對(duì)外泌體進(jìn)行定量或分類,。乳液提取試劑盒方法外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。

細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來(lái)完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體,、微泡和凋亡小體。其中,，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細(xì)胞分泌，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì),、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì)。來(lái)源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。近年來(lái)，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。

為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀,？答：這種問(wèn)題通常有三種可能性,，其一：使用的細(xì)胞上清或者血清量太低,，從而造成了這樣的結(jié)果。其二：使用了不透明的超速離心管,，一般來(lái)說(shuō)外泌體產(chǎn)量都比較小,，所以凡是不透明的管子，基本都是比較難見(jiàn)到明顯沉淀的,，可以當(dāng)做有沉淀,，然后操作下去即可。其三：使用了角轉(zhuǎn),。部分品牌離心機(jī)的角轉(zhuǎn)管壁粘附性比較低,，超離結(jié)束沒(méi)多久沉淀就會(huì)滑落下去，所以請(qǐng)?jiān)陔x心結(jié)束時(shí)趕緊去收樣,。外泌體的角色：1,、外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細(xì)胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用，活躍細(xì)胞內(nèi)通路,。2,、外泌體的角色之一：細(xì)胞-細(xì)胞通訊，比如抗原遞呈,。外泌體屬于胞外囊泡類,，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。

外泌體遞送藥物的優(yōu)勢(shì)：許多新的候選藥物（例如蛋白質(zhì)和核酸）在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定,，對(duì)診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn)。鑒于與許多當(dāng)前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問(wèn)題,，外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子,。由于外泌體體積小和其本身就是細(xì)胞產(chǎn)物，通過(guò)外泌體遞送藥物可以避免巨噬細(xì)胞的吞噬作用或降解,，還可以在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間循環(huán),，保持效果。其中,，外泌體能夠穿過(guò)血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經(jīng)系統(tǒng)是外泌體遞送藥物的一個(gè)明顯優(yōu)勢(shì),。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1,、LAMP2,。外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體。海洋生物外泌體tmt

外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,，從而活躍細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。外泌體機(jī)制研究套路

外泌體中常見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合,，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白,。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1,、2,、4、5,、6,、7、11等）,。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）,、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細(xì)胞來(lái)源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源),、CD86(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細(xì)胞）,。外泌體發(fā)揮功能：將細(xì)胞或組織中多余的或者有害的分子排除，這為研究生物標(biāo)志物提供了可能,。外泌體機(jī)制研究套路

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