NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單,、更能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測(cè)速度更快。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,，用激光光束穿過(guò)樣本,，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射，通過(guò)裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,，捕捉外泌體的布朗運(yùn)動(dòng),，實(shí)現(xiàn)顆粒可視化,。然后使用Stokes-Einstein方程來(lái)測(cè)量粒子的平均速度,，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測(cè)量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體,，因此無(wú)法排除其他物質(zhì)的干擾,。外泌體的提取的方式：免疫磁珠法。乳液外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

近年來(lái),，外泌體的捕獲技術(shù)越來(lái)越多,，微流體系也被用于外泌體提取，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體,。采用這種方法獲得的樣品純度高,，且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè)。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,，并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜，所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長(zhǎng)度,。另外,，樣品量的注入速率比較低，因此,，對(duì)于大樣品量,，將需要較長(zhǎng)的處理時(shí)間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能,。目前,，研究人員已開(kāi)發(fā)了多種方法來(lái)分離外泌體，離心技術(shù)仍然是常用方法,，其他方法，例如過(guò)濾,、磁珠分離和色譜法等,，也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但目前仍然沒(méi)有一種公認(rèn)有效的提取方法,，研究人員應(yīng)針對(duì)不同來(lái)源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案,。北京外泌體示蹤外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體，因此無(wú)法排除其他物質(zhì)干擾,。

外泌體的提取,、純化和鑒定：每一個(gè)外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過(guò)形態(tài)學(xué),、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的,。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長(zhǎng)與遷移,、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細(xì)胞或組織,，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。

外泌體的提取分離方法：1、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡(jiǎn)單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類(lèi)型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量。2,、密度梯度離心：在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法,。通過(guò)密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時(shí)。外泌體作為一個(gè)新型的研究熱點(diǎn),，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,。

流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,，可用流式細(xì)胞儀檢測(cè)到陽(yáng)性表達(dá),，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體的定量。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)時(shí)需要單顆粒懸浮液,，當(dāng)外泌體濃度高或分離過(guò)程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒,，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,。因此，為了通過(guò)流式細(xì)胞儀觀察,，需要將外泌體通過(guò)免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細(xì)胞術(shù)之前,，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當(dāng)樣品通過(guò)流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號(hào)，不只可以對(duì)外泌體進(jìn)行高通量分析,，還可以基于抗原表達(dá)對(duì)外泌體進(jìn)行定量或分類(lèi),。外泌體中常見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥(niǎo)苷酸三磷酸酶家族的一種,。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,，調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng)。江西CD81外泌體慢病毒包裝

外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸,、脂類(lèi)等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。乳液外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

尺寸排阻色譜法（SEC）根據(jù)大小來(lái)分離樣本,。該技術(shù)應(yīng)用了一個(gè)裝有多孔聚合物珠的色譜柱，該聚合物珠包含多個(gè)孔和通道,，分子根據(jù)其直徑穿過(guò),。半徑小的分子穿過(guò)柱子的孔遷移需要較長(zhǎng)的時(shí)間，而大分子則較早地從柱子上洗脫下來(lái),。SEC可精確分離大分子和小分子,。與離心分離方法相比，SEC分離的外泌體不受剪切力的影響,，剪切力可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu)。此方法分離到的外泌體純度較高,，在電鏡下大小均一,，但是獲取量少，所需設(shè)備特殊,。此外,，SEC方法與超濾相結(jié)合已被用于尿液來(lái)源的外泌體的分離和分析。乳液外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

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