外泌體的提取、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）,、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的,。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，能比較好的保護其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細胞或組織,，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。腹水外泌體融合實驗外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用，活躍細胞內(nèi)通路,。外泌體存在于組織樣本中,，如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。泌康霧化液外泌體

外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白,。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1,、2,、4、5,、6,、7、11等）,。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）,、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源),、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細胞）,。外泌體的提取的方式：超速離心法。乳液提取試劑盒服務(wù)免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合,。

尺寸排阻色譜法（SEC）根據(jù)大小來分離樣本。該技術(shù)應(yīng)用了一個裝有多孔聚合物珠的色譜柱,，該聚合物珠包含多個孔和通道,，分子根據(jù)其直徑穿過。半徑小的分子穿過柱子的孔遷移需要較長的時間,，而大分子則較早地從柱子上洗脫下來,。SEC可精確分離大分子和小分子。與離心分離方法相比,，SEC分離的外泌體不受剪切力的影響,，剪切力可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu),。此方法分離到的外泌體純度較高,，在電鏡下大小均一,，但是獲取量少，所需設(shè)備特殊,。此外,，SEC方法與超濾相結(jié)合已被用于尿液來源的外泌體的分離和分析。

外泌體的提取分離方法：1,、超濾離心：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,，便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細胞外泌體的一種新方法,。2、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標記物（如CD63,、CD9蛋白）,，用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高,、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗,，難以普遍普及,。需要開發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術(shù)和策略。

外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,，是具有生物活性的脂雙層囊泡,，大小約為30-100nm，由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產(chǎn)生和釋放,。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用,，并影響細胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng)。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運至靶細胞,。外泌體貨物的組成非常多樣化，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白,、趨化因子,、細胞因子,、細胞受體、脂質(zhì)以及不同的核酸,，如miRNA和環(huán)狀RNA,。外泌體可以通過多種方法給藥，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。外泌體的直徑比微泡的要小,，后者直徑為100nm-1μm。成都外泌體label free

對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷,、療效評價和預(yù)后分析,。泌康霧化液外泌體

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,，由于抗體-抗原相互作用,，表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉,，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體,。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體,，當使用標準液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標準曲線時,，甚至可以進行定量。但是,，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預(yù)處理,。同樣，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度,。泌康霧化液外泌體

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