為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀？答：這種問題通常有三種可能性,，其一：使用的細胞上清或者血清量太低,，從而造成了這樣的結(jié)果。其二：使用了不透明的超速離心管,，一般來說外泌體產(chǎn)量都比較小，所以凡是不透明的管子,，基本都是比較難見到明顯沉淀的,，可以當(dāng)做有沉淀，然后操作下去即可,。其三：使用了角轉(zhuǎn),。部分品牌離心機的角轉(zhuǎn)管壁粘附性比較低，超離結(jié)束沒多久沉淀就會滑落下去,，所以請在離心結(jié)束時趕緊去收樣,。外泌體的角色：1、外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用，活躍細胞內(nèi)通路,。2,、外泌體的角色之一：細胞-細胞通訊，比如抗原遞呈,。外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體,。體液提取試劑盒原理

近年來，外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,，微流體系也被用于外泌體提取,，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,，且可及時獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測,。在初次注射時外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面，并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,，所需的樣本量取決于流動通道的長度。另外,，樣品量的注入速率比較低,，因此，對于大樣品量,，將需要較長的處理時間,。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能。目前,，研究人員已經(jīng)開發(fā)了多種方法來分離外泌體,，離心技術(shù)仍然是常用方法，其他方法,，例如過濾,、磁珠分離和色譜法等，也顯示出獨特的優(yōu)勢,，但目前仍然沒有一種公認有效的提取方法,，研究人員應(yīng)針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。外泌體通用標(biāo)志物外泌體其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞,、成纖維細胞和間充質(zhì)細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產(chǎn)生特定的作用，包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞,。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹,、脂筏,、吞噬作用、小凹和大胞飲作用,。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細胞內(nèi)信號或融合,，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細胞質(zhì)中。近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域,。

外泌體（Exosomes）是細胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles,，EVs），其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,，同時也存在于組織樣本中,，如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進行消化,，經(jīng)水浴,、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,，混勻，置于冰上,。再進行一系列的差速超速離心過程,，包括除雜、濾膜過濾,、超離等。結(jié)尾用PBS重懸外泌體,，用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡（TEM）,、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定,。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1,、LAMP2,。

ELISA與WB的原理一樣，在抗體包被的微孔板中加入待測樣品,、封閉,、一抗孵育，洗滌后加入酶標(biāo)待測物形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，徹底洗滌后加顯色劑并用酶標(biāo)儀測定吸光值,，結(jié)尾用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算外泌體表達量。ELISA能實現(xiàn)對外泌體特異性蛋白的定量,。其他外泌體鑒定方法還有微流體測定法和外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)分析等,。由于外泌體在各種生命過程中的重要作用及其作為疾病生物標(biāo)志物和藥物輸送系統(tǒng)的潛力，人們對此領(lǐng)域的興趣越來越高,。盡管目前在技術(shù)上取得了長足的進步,，但尚未建立對外泌體進行準(zhǔn)確和標(biāo)準(zhǔn)化鑒定以及定量的方法，關(guān)于外泌體的量應(yīng)由囊泡顆粒的數(shù)量,、囊泡蛋白的量或囊泡數(shù)與蛋白之比來定義仍存在比較多爭論,。建立外泌體分離、表征以及效價測定的標(biāo)準(zhǔn)化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題,。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷,、療效評價和預(yù)后分析。福建外泌體攝取

外泌體可以通過多種方法給藥,，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。體液提取試劑盒原理

外泌體的提取、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）,、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實現(xiàn)的。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，能比較好的保護其包被的物質(zhì),，且能靶向特定細胞或組織,，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。腹水外泌體融合實驗外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,，活躍細胞內(nèi)通路,。體液提取試劑盒原理

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