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尿液外泌體提取試劑盒步驟

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-11

DLS使用由于粒子的布朗運(yùn)動(dòng)而產(chǎn)生的波動(dòng)散射光的強(qiáng)度來估計(jì)外泌體顆粒的大小分布及其zeta電位,。DLS樣品制備方便,,只需要簡單的過濾,,測(cè)量速度較快,,需要的樣品體積較少。但由于動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)是基于光強(qiáng)測(cè)量,,散射光的強(qiáng)度與粒徑的六次方成正比,,使得當(dāng)測(cè)量多種粒徑的混合懸浮液時(shí),通常會(huì)偏向于檢測(cè)較大粒徑產(chǎn)生的散射光,,比較難檢測(cè)到較小顆粒,。所以DLS不適合對(duì)粒徑分布較寬的外泌體樣本的測(cè)量,只適合尺寸較為均一的外泌體樣本,,并且無法測(cè)量樣品中外泌體的濃度,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。尿液外泌體提取試劑盒步驟

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外泌體的相關(guān)成分:1,、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,,是磷脂雙分子層。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,,能綁定特異性的肽鏈。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins、RAN,、GTPases,。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide,、SM、PC,,限制膜流動(dòng),,參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6,、外泌體中含有核酸,,包括miRNA、DNA,、lncRNA,、mRNA,;同時(shí)還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中,。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral、ARF6,、PLD2,、RAB家族。8,、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),,進(jìn)行主動(dòng)包埋。外泌體的膜同細(xì)胞一樣,,是磷脂雙分子層,。江蘇外泌體熒光標(biāo)記外泌體的提取的方式:免疫磁珠法。

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透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評(píng)估外泌體形態(tài),、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,,該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測(cè)電子類別,在SEM中,,電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,,捕獲并檢測(cè)散射的電子,從而生成粒子圖像,。但是,,在TEM中,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,,并使用熒光屏進(jìn)行檢測(cè),。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高,,外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響;另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,,不適合進(jìn)行大量快速的測(cè)量,;而且由于樣本經(jīng)過了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程,,對(duì)生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞,,從而影響觀察的效果,無法準(zhǔn)確測(cè)量外泌體濃度。

外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體,,是具有生物活性的脂雙層囊泡,,大小約為30-100nm,由不同類型的正常細(xì)胞和瘤子細(xì)胞自然產(chǎn)生和釋放,。這些囊泡在細(xì)胞間通訊中起重要作用,,并影響細(xì)胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng)。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞,。外泌體貨物的組成非常多樣化,包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白,、趨化因子,、細(xì)胞因子、細(xì)胞受體,、脂質(zhì)以及不同的核酸,,如miRNA和環(huán)狀RNA。外泌體可以通過多種方法給藥,,靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。建立外泌體分離、表征以及效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題,。

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外泌體的基本信息:1,、外泌體的大小:外泌體的直徑約40-150nm,。2,、從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。3,、外泌體屬于胞外囊泡類,,除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。4,、外泌體的直接比微泡的要小,,后者直徑為100nm-1μm。5,、外泌體的數(shù)量:人體中大約有1014個(gè),,近乎于平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。6,、外泌體的細(xì)胞源:人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,。7、外泌體具有異質(zhì)性,,即使是同一種細(xì)胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別,。8,、外泌體的存在:外泌體幾乎存在于所有的組織,、細(xì)胞間隙,、體液中。9,、外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體,。隨著外泌體研究的不斷深入,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域,。福建外泌體攝取

外泌體的提取的方式:超速離心法。尿液外泌體提取試劑盒步驟

外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,,通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,,其大小均一,直徑為40-100nm,,密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,,可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能,、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等,。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體,。尿液外泌體提取試劑盒步驟

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