外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成,。它也由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,，這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細(xì)胞。根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫(kù)ExoCarta的資料,，目前已知約有8000種蛋白質(zhì)和194種脂質(zhì)與外泌體相關(guān),。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細(xì)胞分泌，包括滑膜液,，母乳,，血液，尿液,，唾液,，羊水和血液中的血清，這表明它們?cè)诩?xì)胞間通訊和觸發(fā)生理反應(yīng)中起著重要的作用,。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì),。簡(jiǎn)而言之，它們是天然膜囊泡,，將蛋白質(zhì),，RNA，DNA和脂質(zhì)從一個(gè)細(xì)胞攜帶到另一個(gè)細(xì)胞,，調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物功能,。外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化,、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用。體液外泌體質(zhì)譜

外泌體的提取,、純化和鑒定：每一個(gè)外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的,。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長(zhǎng)與遷移、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì),，且能靶向特定細(xì)胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。腹水外泌體融合實(shí)驗(yàn)外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用,，活躍細(xì)胞內(nèi)通路。福建海洋生物外泌體外泌體屬于胞外囊泡類,，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡,。

外泌體的生物發(fā)生和鑒定。液體和細(xì)胞外成分,，如蛋白質(zhì),、脂類、代謝物,、小分子和離子,，可以通過內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷，與細(xì)胞表面蛋白一起進(jìn)入細(xì)胞,。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向,。這一出芽過程導(dǎo)致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)、跨高爾基網(wǎng)絡(luò)(TGN)和線粒體預(yù)先形成的早期核內(nèi)體融合,。ESEs也可以與ER和TGN融合,，這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達(dá)它們的。因此,，一些ESEs可以包含膜和腔的成分,，可以表示不同的起源。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白,、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白,、細(xì)胞內(nèi)蛋白,、RNA、DNA,、氨基酸和代謝物,。

AFC自動(dòng)收集器是將qEV分離法這一過程自動(dòng)化的儀器，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi)，根據(jù)稱重精確測(cè)量流體體積,，可精確的測(cè)量到樣品中每一個(gè)液滴的重量并精確測(cè)量總重量,。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨(dú)中心孔中并送至廢液桶，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中,。在提取期間,，當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后，轉(zhuǎn)盤會(huì)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)到下一個(gè)微量離心管繼續(xù)收集,，到收集完成后自動(dòng)停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率,，而且由于采用微滴計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行定量,，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號(hào)和Ct值，對(duì)所測(cè)樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量,。外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體,。

肉瘤細(xì)胞可以通過產(chǎn)生異常的抗肉瘤或肉瘤免疫應(yīng)答并促進(jìn)瘤子細(xì)胞的活動(dòng)而大量產(chǎn)生外泌體，這些外泌體富含促病的細(xì)胞成分,，例如PD-L1,、mRNA和micro-RNA等免疫阻止蛋白，參與病癥的發(fā)展,、轉(zhuǎn)移和耐藥性,。值得注意的是，肉瘤分泌的外泌體表面和外泌體顆粒中均存在的PD-L1,。ESCRT（運(yùn)輸所需的內(nèi)體分選復(fù)合體）參與將生物分子包裝到外泌體中,，nSMase2（中性鞘磷脂酶2）和Rab蛋白調(diào)節(jié)外泌體分泌。已確定ESCRT,、Rab27a和nSMase2參與外泌體PD-L1的包裝和分泌,。外泌體可以將PD-L1轉(zhuǎn)運(yùn)至其他PD-L1表達(dá)低或沒有PD-L1的細(xì)胞，并可能與PD-1結(jié)合,。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)病）方面的潛力,。天津外泌體

外泌體研究使用血漿樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)較好,。體液外泌體質(zhì)譜

外泌體的提取分離方法：1、超濾離心：由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì),，利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離，便可獲得外泌體,。超濾離心法簡(jiǎn)單高效,，且不影響外泌體的生物活性，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。2,、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63,、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實(shí)驗(yàn),，難以普遍普及。體液外泌體質(zhì)譜

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