外泌體提取在短時間(一周之內(nèi))使用,,可以放在4度保存,,如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存,。也可以將外泌體進(jìn)行分裝,,分別放在-20度或-80度。外泌體檢測方法:外泌體分離之后,,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,,多角度進(jìn)行鑒定。l,、透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。2,、納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。度梯度離心法,,用此種方法分離到的外泌體純度高,。血漿血清外泌體提取試劑盒
NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,,相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單,、更能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度更快,。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,,用激光光束穿過樣本,,激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,,通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,捕捉外泌體的布朗運(yùn)動,,實(shí)現(xiàn)顆??梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,繼而估算粒子的大小,。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,,但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),另外,,NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動的蛋白質(zhì)聚集體,因此無法排除其他物質(zhì)的干擾,。福建外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),。
外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,,通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,,其大小均一,,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,,可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能,、參與細(xì)胞生物學(xué)活動等,。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體,。
外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成,。它也由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細(xì)胞,。根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫ExoCarta的資料,,目前已知約有8000種蛋白質(zhì)和194種脂質(zhì)與外泌體相關(guān)。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細(xì)胞分泌,,包括滑膜液,,母乳,血液,,尿液,,唾液,羊水和血液中的血清,,這表明它們在細(xì)胞間通訊和觸發(fā)生理反應(yīng)中起著重要的作用,。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì)。簡而言之,,它們是天然膜囊泡,,將蛋白質(zhì),RNA,,DNA和脂質(zhì)從一個細(xì)胞攜帶到另一個細(xì)胞,,從而調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物功能。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動分泌釋放,。
透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,,在SEM中,電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,,捕獲并檢測散射的電子,,從而生成粒子圖像。但是,,在TEM中,,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,,并使用熒光屏進(jìn)行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一,,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響,;另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,,不適合進(jìn)行大量快速的測量;而且由于樣本經(jīng)過了干燥,、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程,,對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞,從而影響觀察的效果,,無法準(zhǔn)確測量外泌體濃度,。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),,難以普遍普及,。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡,。胸水外泌體PKH67
采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,,外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響。血漿血清外泌體提取試劑盒
Exosome,,中文名外泌體,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),,但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物,。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸,,能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。2015年,,隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出,越來越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療,。外泌體作為一個新型的研究熱點(diǎn),由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,,已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式,,在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。外泌體的提取的方式:超速離心法。血漿血清外泌體提取試劑盒
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