血漿中的外泌體蛋白既可以當(dāng)作標(biāo)志物,，也可以進(jìn)行機(jī)理研究？首先,，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個(gè)亞組：疾病進(jìn)展期和疾病慢性期,。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白組,，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進(jìn)展期CLL患者中明顯高表達(dá)，可以作為CLL進(jìn)展期診斷的輔助標(biāo)志物,。進(jìn)一步,，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期CLL患者外泌體中的高表達(dá)蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)，而NF-κB通路正是承接此效應(yīng)的關(guān)鍵通路,。通過從進(jìn)展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細(xì)胞中,，證實(shí)了S100-A9+外泌體能夠明顯促進(jìn)進(jìn)展期CLL患者PBMC細(xì)胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進(jìn)一步活躍NF-κB通路,。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進(jìn)展期CLL的標(biāo)志物,，并證實(shí)了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控，不斷活躍進(jìn)展期CLL患者自身PBMC細(xì)胞中的NF-κB通路,，促進(jìn)CLL進(jìn)展的特殊機(jī)理,。外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化,、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用。流式 分選外泌體

近年來,，外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,，微流體系也被用于外泌體提取，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體,。采用這種方法獲得的樣品純度高,，且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè)。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,，并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜，所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長度,。另外,，樣品量的注入速率比較低，因此,，對(duì)于大樣品量,，將需要較長的處理時(shí)間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能,。目前,，研究人員已經(jīng)開發(fā)了多種方法來分離外泌體,，離心技術(shù)仍然是常用方法,，其他方法，例如過濾,、磁珠分離和色譜法等,，也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),，但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法，研究人員應(yīng)針對(duì)不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案,。細(xì)胞上清外泌體NTA外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,，能綁定特異性的肽鏈。

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),，現(xiàn)今,，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,，且外泌體天然存在于體液中,，包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊,，對(duì)外泌體的研究興趣日益增長,，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足,，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心，這種操作簡(jiǎn)單,、省時(shí),，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,，用此種方法分離到的外泌體純度高,，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí),，量少,。膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ)，它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號(hào)通路的活躍,。外泌體實(shí)際應(yīng)用之前,，需要使用大型動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究和臨床試驗(yàn)。

內(nèi)化的外泌體和內(nèi)源性產(chǎn)生的外泌體的細(xì)胞旅程：外泌體可以通過不同的機(jī)制直接進(jìn)入細(xì)胞,。外泌體由細(xì)胞通過內(nèi)吞作用過程從頭生成,。外泌體不斷地被細(xì)胞產(chǎn)生和吸收。它們可能是新生成的外泌體和消耗的外泌體的混合物,。目前尚不清楚內(nèi)生性產(chǎn)生或消耗的外泌體是一起釋放還是單獨(dú)釋放,。被吸收的外泌體會(huì)被溶酶體降解。進(jìn)入細(xì)胞的外泌體可能進(jìn)入或與已存在的ESEs融合,，隨后解體并將其內(nèi)容物釋放到細(xì)胞質(zhì)中,。另外，內(nèi)泌體可以與質(zhì)膜融合并在細(xì)胞外釋放外泌體,。外泌體的提取的方式：免疫磁珠法,。干細(xì)胞提取試劑盒廠家

外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,，從而活躍細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,。流式 分選外泌體

細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細(xì)胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì),、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。流式 分選外泌體

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