外泌體的相關成分：1,、外泌體的膜同細胞一樣，是磷脂雙分子層,。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈,。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1,、LAMP2,。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins,、RAN,、GTPases。5,、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide、SM,、PC,，限制膜流動，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導,、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6,、外泌體中含有核酸,，包括miRNA,、DNA、lncRNA,、mRNA,；同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中,。7,、與外泌體產(chǎn)生相關的重要分子：Ral,、ARF6,、PLD2、RAB家族,。8,、一些物質(zhì)進行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU），進行主動包埋,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術,。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌,。外泌體 peg

細胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關鍵分子。近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應用已經(jīng)涉及瘤子診療領域、醫(yī)學基礎和免疫領域,、寄生蟲領域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術,。湖南外泌體芯片外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運至靶細胞。

血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物,，也可以進行機理研究,？首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個亞組：疾病進展期和疾病慢性期,。然后利用質(zhì)譜技術分析了患者血漿外泌體蛋白組,，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達，可以作為CLL進展期診斷的輔助標志物,。進一步,，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應激有關，而NF-κB通路正是承接此效應的關鍵通路,。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細胞中,，證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進一步活躍NF-κB通路,。研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進展期CLL的標志物,，并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控，不斷活躍進展期CLL患者自身PBMC細胞中的NF-κB通路,，促進CLL進展的特殊機理,。

外泌體的提取分離方法：1、超濾離心：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì),，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離，便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,，且不影響外泌體的生物活性，是提取細胞外泌體的一種新方法,。2,、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。外泌體研究使用血漿樣本進行實驗較好,。

NTA技術已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過樣本,，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運動,，實現(xiàn)顆?？梢暬Ｈ缓笫褂肧tokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,，繼而估算粒子的大小,。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體,，因此無法排除其他物質(zhì)干擾。人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體,，包括內(nèi)皮細胞,、免疫細胞、血小板,、平滑肌細胞等,。杭州CD63外泌體慢病毒

采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響,。外泌體 peg

外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,，是具有生物活性的脂雙層囊泡，大小約為30-100nm,，由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產(chǎn)生和釋放,。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用，并影響細胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應,。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運至靶細胞。外泌體貨物的組成非常多樣化,，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白,、趨化因子、細胞因子,、細胞受體,、脂質(zhì)以及不同的核酸,，如miRNA和環(huán)狀RNA。外泌體可以通過多種方法給藥,，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。外泌體 peg

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