根據(jù)內(nèi)侵量的不同，可以產(chǎn)生不同尺寸,、不同含量的ILV,。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合,，較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解,。降解產(chǎn)物可被細(xì)胞回收利用,。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解。不遵循這一軌跡的MVBs可通過細(xì)胞骨架和微管網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)運(yùn)至質(zhì)膜,，借助mvb-?？康鞍淄？吭谫|(zhì)膜的腔側(cè),。隨后胞吐導(dǎo)致具有與質(zhì)膜相似的脂質(zhì)雙分子層方向的外泌體的釋放,。有幾種蛋白參與了外泌體的生物發(fā)生，包括RabGTPases,、ESCRT蛋白,，以及其他也被用作外泌體標(biāo)記的蛋白(CD9、CD81,、CD63,、flotillin、TSG101,、神經(jīng)酰胺和Alix),。外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成。如何用納米流式技術(shù)分離外泌體細(xì)胞

血漿中的外泌體蛋白既可以當(dāng)作標(biāo)志物,，也可以進(jìn)行機(jī)理研究,？首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個(gè)亞組：疾病進(jìn)展期和疾病慢性期,。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白組,，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進(jìn)展期CLL患者中明顯高表達(dá),，可以作為CLL進(jìn)展期診斷的輔助標(biāo)志物,。進(jìn)一步，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期CLL患者外泌體中的高表達(dá)蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān),，而NF-κB通路正是承接此效應(yīng)的關(guān)鍵通路,。通過從進(jìn)展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細(xì)胞中，證實(shí)了S100-A9+外泌體能夠明顯促進(jìn)進(jìn)展期CLL患者PBMC細(xì)胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào),，進(jìn)一步活躍NF-κB通路,。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進(jìn)展期CLL的標(biāo)志物，并證實(shí)了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控,，不斷活躍進(jìn)展期CLL患者自身PBMC細(xì)胞中的NF-κB通路,，促進(jìn)CLL進(jìn)展的特殊機(jī)理。成都CD81外泌體慢病毒包裝外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合,。

尺寸排阻色譜法（SEC）根據(jù)大小來分離樣本,。該技術(shù)應(yīng)用了一個(gè)裝有多孔聚合物珠的色譜柱，該聚合物珠包含多個(gè)孔和通道,，分子根據(jù)其直徑穿過,。半徑小的分子穿過柱子的孔遷移需要較長(zhǎng)的時(shí)間,，而大分子則較早地從柱子上洗脫下來。SEC可精確分離大分子和小分子,。與離心分離方法相比,，SEC分離的外泌體不受剪切力的影響，剪切力可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu),。此方法分離到的外泌體純度較高,，在電鏡下大小均一，但是獲取量少,，所需設(shè)備特殊,。此外，SEC方法與超濾相結(jié)合已被用于尿液來源的外泌體的分離和分析,。

外泌體遞送藥物的優(yōu)勢(shì)：許多新的候選藥物（例如蛋白質(zhì)和核酸）在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定,，對(duì)診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn)。鑒于與許多當(dāng)前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問題,，外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子,。由于外泌體體積小和其本身就是細(xì)胞產(chǎn)物，通過外泌體遞送藥物可以避免巨噬細(xì)胞的吞噬作用或降解,，還可以在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間循環(huán),，保持效果。其中,，外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經(jīng)系統(tǒng)是外泌體遞送藥物的一個(gè)明顯優(yōu)勢(shì),。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1,、LAMP2,。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。

外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1,、2、4,、5,、6、7,、11等）,。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）,、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細(xì)胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來源),、CD86(抗原提呈細(xì)胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細(xì)胞）,。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞,。正青春外泌體公司

外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),。如何用納米流式技術(shù)分離外泌體細(xì)胞

外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細(xì)胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,，同時(shí)也存在于組織樣本中,，如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體，但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性,，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣,。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞，調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng),。同時(shí),，外泌體具有抗原提呈,、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用,；此外,，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送。外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用,，活躍細(xì)胞內(nèi)通路,。如何用納米流式技術(shù)分離外泌體細(xì)胞

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