ELISA與WB的原理一樣,，在抗體包被的微孔板中加入待測樣品,、封閉,、一抗孵育,，洗滌后加入酶標待測物形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，徹底洗滌后加顯色劑并用酶標儀測定吸光值,，結尾用標準曲線計算外泌體表達量,。ELISA能實現對外泌體特異性蛋白的定量,。其他外泌體鑒定方法還有微流體測定法和外泌體蛋白質組學分析等,。由于外泌體在各種生命過程中的重要作用及其作為疾病生物標志物和藥物輸送系統(tǒng)的潛力,，人們對此領域的興趣越來越高。盡管目前在技術上取得了長足的進步,，但尚未建立對外泌體進行準確和標準化鑒定以及定量的方法,，關于外泌體的量應由囊泡顆粒的數量,、囊泡蛋白的量或囊泡數與蛋白之比來定義仍存在比較多爭論。建立外泌體分離,、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題,。外泌體可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。吉林腦脊液外泌體

NTA技術已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術的樣本處理更簡單,、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,，捕捉外泌體的布朗運動，實現顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小,。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數據收集和分析參數,，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質聚集體，因此無法排除其他物質的干擾,。細胞提取試劑盒原理外泌體的提取的方式：PS親和法,。

外泌體的臨床應用：間充質干細胞是目前較普遍使用的細胞類型，它具有自我更新,，多向分化,、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調節(jié),、來源普遍等特點,，在臨床診療中取得了良好的成果。間充質干細胞來源外泌體與間充質干細胞有著相似的功能,，包括修復與再生組織,、阻止炎癥反應及調節(jié)機體免疫，但外泌體相對于間充質干細胞又有許多優(yōu)勢,。首先,，間充質干細胞來源外泌體更穩(wěn)定，更好保存，易于管理和控制,，可以人為改變其內容物的種類和數量,。其次，它們沒有活細胞,，不會像間充質干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重,；另外，它有可能避免某些針對間充質干細胞的調控問題,，間充質干細胞來源外泌體有代替間充質干細胞的趨勢,。干細胞外泌體攝取流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升,。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1,、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高,、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,，不便進行下一步的實驗。2,、PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高,。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內注射,。3,、色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設備，應用不普遍,。外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,，是具有生物活性的脂雙層囊泡。

密度梯度離心法根據在蔗糖,、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,，目前普遍應用的是蔗糖，這種方法可以成功地將亞細胞成分（例如過氧化物酶體，線粒體和核內體）分離到密度梯度溶液中的不同層中,。樣品被放置在梯度的頂部,，當施加離心力時，樣品中的顆粒以獨特的速率通過梯度,，該梯度以從上到下的密度增加,。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集，隨后可以通過分餾收集,，密度梯度超速離心對從蛋白質聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效,。此方法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,、費時且會造成外泌體損失,。免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合,。在研究和評估外泌體的副作用和功效時,，必須考慮到肉瘤細胞來源的外泌體可能增強肉瘤生長的潛在風險。外泌體多少錢

外泌體功能在研究初期階段發(fā)現是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質,。吉林腦脊液外泌體

外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現外泌體聚集成塊,，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,，這種操作簡單,、省時，不影響外泌體的生物活性,，但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高,，但是前期準備工作繁雜,，耗時，量少,。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎,，它可能活躍受體并隨后導致相關信號通路的活躍。吉林腦脊液外泌體

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