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來源: 發(fā)布時間:2023-03-16

外泌體的提取主要包括以下幾種方式:1、免疫磁珠法,,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,,特異性高、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備,,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗,。2,、PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,,純度較高,。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,,外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。3、色譜法,,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍,。在免疫系統(tǒng)中,,據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉(zhuǎn)移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制。dir標記外泌體

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眾所周知外泌體是供體細胞分泌出來的胞外囊泡,,被受體細胞吸收后起到調(diào)控受體細胞功能,,這篇綜述文章主要討論了外泌體的生成、生化性質(zhì)以及作為藥物遞送載體的潛力,。外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞、肉瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復等,。不同細胞分泌的外泌體具有不同的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,能比較好的保護其包被的物質(zhì),,且能靶向特定細胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。乳液外泌體提取試劑盒報價外泌體的提取的方式:過濾離心,。

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PEG沉淀法分離外泌體:通常通過將無水聚合物,如聚乙二醇(PEG),,與樣品混合來沉淀外泌體,。PEG聚合物競爭性結(jié)合水分子,增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體,,然后通過離心分離外泌體,。這種分離的方法快速,簡便,,可用于各種起始體積(從100μL到幾毫升)適合于各種研究和臨床設(shè)定,。然而,,這種方法缺乏選擇性,,PEG聚合物不只會導致外泌體小泡沉淀,還會引起其他細胞外囊泡,、細胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀,。因此,在使用這種方法之前,,必須進行樣品預處理,,例如過濾或超速離心,以減少較終的外泌體制劑的污染,。

外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,,通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,其大小均一,,直徑為40-100nm,,密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細胞,、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,,可作為疾病診斷標記物,、調(diào)控靶細胞功能、參與細胞生物學活動等,。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生;骨髓間充質(zhì)干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿ΑR粋€推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,。

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外泌體的提取,、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(電子顯微鏡技術(shù)),、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的,。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長與遷移,、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能比較好的保護其包被的物質(zhì),,且能靶向特定細胞或組織,,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。腹水外泌體融合實驗外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,,活躍細胞內(nèi)通路,。外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。細菌提取試劑盒價錢

外泌體的提取分離方法:PEG-base沉淀法,。dir標記外泌體

外泌體的提取分離方法:1、PEG-base沉淀法:聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。2,、試劑盒提取:近幾年來,,市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,,有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。dir標記外泌體

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