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成都外泌體示蹤

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-19

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性,,它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用,。除了它們的診療潛力,外泌體也有幫助疾病診斷的潛力,。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報(bào)道,并且通過(guò)生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成,。基于外泌體的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,。疾病的進(jìn)展和對(duì)診療的反應(yīng)也可以通過(guò)外泌體的多組分分析來(lái)確定,。流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,,其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。成都外泌體示蹤

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外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子,、生長(zhǎng)因子)以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移,、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過(guò)程,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),,另一方面也可以作為診療手段,,未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究,,應(yīng)選用血漿還是血清,?答:血清是血液凝固之后收集的液體,所以其中少了纖維蛋白原,,凝血因子,,以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,,具有凝血功能,。在凝血過(guò)程中血小板會(huì)分泌大量的外泌體,有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來(lái)自額外的分泌,。細(xì)胞中的外泌體外泌體分離之后,,需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。

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NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,,相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單,、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快,。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,,用激光光束穿過(guò)樣本,,激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,通過(guò)裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,,捕捉外泌體的布朗運(yùn)動(dòng),,實(shí)現(xiàn)顆粒可視化,。然后使用Stokes-Einstein方程來(lái)測(cè)量粒子的平均速度,,繼而估算粒子的大小。NTA能夠測(cè)量粒徑10-1000nm之間的顆粒,,包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,,但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),另外,,NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體,,因此無(wú)法排除其他物質(zhì)的干擾。

密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖,、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,,目前普遍應(yīng)用的是蔗糖,這種方法可以成功地將亞細(xì)胞成分(例如過(guò)氧化物酶體,,線粒體和核內(nèi)體)分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部,,當(dāng)施加離心力時(shí),,樣品中的顆粒以獨(dú)特的速率通過(guò)梯度,該梯度以從上到下的密度增加,。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,,隨后可以通過(guò)分餾收集,密度梯度超速離心對(duì)從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效,。此方法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣、費(fèi)時(shí)且會(huì)造成外泌體損失,。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。磁珠免疫法分離的外泌體,,生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及,。

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細(xì)胞攝取診療性外泌體:從樹(shù)突狀細(xì)胞,、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用,包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞,。診療性外泌體對(duì)靶細(xì)胞的影響可能是通過(guò)不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來(lái)控制的,。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹,、脂筏,、吞噬作用、小凹和大胞飲作用,。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合,,從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中。近年來(lái),,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲(chóng)領(lǐng)域,。外泌體較有用的特性之一是它們穿過(guò)屏障(如細(xì)胞質(zhì)膜和血/腦屏障)的能力,。吉林CD9外泌體慢病毒包裝

度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,。成都外泌體示蹤

外泌體中常見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,,是鳥(niǎo)苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合,,有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,,RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白,。除了RAB蛋白,,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2,、4,、5、6,、7,、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)),、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33(結(jié)腸上皮細(xì)胞來(lái)源),、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)、CD86(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)以及乳凝集素(不成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞),。成都外泌體示蹤

上海宇玫博生物科技有限公司正式組建于2015-10-16,,將通過(guò)提供以外泌體提取試劑盒,外泌體,,外泌體檢測(cè),,外泌體提取等服務(wù)于于一體的組合服務(wù)。是具有一定實(shí)力的醫(yī)藥健康企業(yè)之一,,主要提供外泌體提取試劑盒,,外泌體,,外泌體檢測(cè),外泌體提取等領(lǐng)域內(nèi)的產(chǎn)品或服務(wù),。同時(shí),,企業(yè)針對(duì)用戶,在外泌體提取試劑盒,,外泌體,,外泌體檢測(cè),外泌體提取等幾大領(lǐng)域,,提供更多,、更豐富的醫(yī)藥健康產(chǎn)品,進(jìn)一步為全國(guó)更多單位和企業(yè)提供更具針對(duì)性的醫(yī)藥健康服務(wù),。公司坐落于上海市閔行區(qū)滬青平公路277號(hào)5樓,,業(yè)務(wù)覆蓋于全國(guó)多個(gè)省市和地區(qū)。持續(xù)多年業(yè)務(wù)創(chuàng)收,,進(jìn)一步為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì),、社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。

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