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外泌體的相關(guān)成分:1,、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,是磷脂雙分子層,。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鏈,。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1,、LAMP2,。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins,、RAN,、GTPases。5,、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide,、SM,、PC,限制膜流動(dòng),,參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6,、外泌體中含有核酸,包括miRNA,、DNA,、lncRNA、mRNA,;同時(shí)還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral,、ARF6,、PLD2、RAB家族,。8,、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進(jìn)行主動(dòng)包埋,。外泌體的膜同細(xì)胞一樣,,是磷脂雙分子層。外泌體的直徑比微泡的要小,,后者直徑為100nm-1μm,。遼寧外泌體熒光標(biāo)記
Exosome,中文名外泌體,,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),,但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。2015年,隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出,,越來越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療,。外泌體作為一個(gè)新型的研究熱點(diǎn),由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,,已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式,,在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。外泌體的提取的方式:超速離心法,。外泌體細(xì)胞培養(yǎng)外泌體中含有核酸,,包括miRNA、DNA,、lncRNA,、mRNA。
外泌體的生物發(fā)生和鑒定,。液體和細(xì)胞外成分,,如蛋白質(zhì)、脂類、代謝物,、小分子和離子,,可以通過內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷,與細(xì)胞表面蛋白一起進(jìn)入細(xì)胞,。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向,。這一出芽過程導(dǎo)致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)、跨高爾基網(wǎng)絡(luò)(TGN)和線粒體預(yù)先形成的早期核內(nèi)體融合,。ESEs也可以與ER和TGN融合,,這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達(dá)它們的。因此,,一些ESEs可以包含膜和腔的成分,,可以表示不同的起源。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白,、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白,、細(xì)胞內(nèi)蛋白,、RNA、DNA,、氨基酸和代謝物,。
外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,,其大小均一,,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,,可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等,。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿ΑM饷隗w的存在:外泌體幾乎存在于所有的組織、細(xì)胞間隙,、體液中,。
外泌體生物學(xué)功能:1、在心血管系統(tǒng)中,,據(jù)報(bào)道,,源自人胚胎干細(xì)胞(ESC)的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2,、在免疫系統(tǒng)中,,據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制;3,、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)中,,外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動(dòng),從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理,;迄今為止,,尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細(xì)胞結(jié)合的途徑。然而,,比較明顯,,其結(jié)合過程從外泌體識(shí)別受體細(xì)胞PM上的特定受體開始。膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),,它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細(xì)胞中,。外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用,,活躍細(xì)胞內(nèi)通路,。外泌體細(xì)胞培養(yǎng)
外泌體是細(xì)胞分泌的納米級膜微粒,能在細(xì)胞與細(xì)胞之間傳遞信息,。遼寧外泌體熒光標(biāo)記
酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA):將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,,將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,由于抗體-抗原相互作用,,表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上,。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉,并使用另一種抗體檢測固定的外泌體,。ELISA已用于從尿液,、血漿和血清中分離出外泌體,當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液(已知外泌體的量)創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),,甚至可以進(jìn)行定量,。但是,此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進(jìn)行預(yù)處理。同樣,,流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度,。遼寧外泌體熒光標(biāo)記
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