根據(jù)內(nèi)侵量的不同,，可以產(chǎn)生不同尺寸,、不同含量的ILV,。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合,，較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解,。降解產(chǎn)物可被細(xì)胞回收利用,。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解,。不遵循這一軌跡的MVBs可通過細(xì)胞骨架和微管網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)運(yùn)至質(zhì)膜,，借助mvb-停靠蛋白?？吭谫|(zhì)膜的腔側(cè),。隨后胞吐導(dǎo)致具有與質(zhì)膜相似的脂質(zhì)雙分子層方向的外泌體的釋放,。有幾種蛋白參與了外泌體的生物發(fā)生,，包括RabGTPases,、ESCRT蛋白，以及其他也被用作外泌體標(biāo)記的蛋白(CD9,、CD81,、CD63、flotillin,、TSG101,、神經(jīng)酰胺和Alix)。超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法,。血漿血清提取試劑盒應(yīng)用

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1、免疫磁珠法,，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高、操作簡(jiǎn)單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備,，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn),。2,、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合,，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整,，純度較高,。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性,，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。3、色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體,。提取試劑盒報(bào)價(jià)外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)。

外泌體分離的主要挑戰(zhàn)之一是消除納米級(jí)污染物,，包括干擾外泌體標(biāo)志物解析的游離核酸和脂蛋白,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。盡管如此,，它仍難以符合臨床應(yīng)用所需的標(biāo)準(zhǔn),，主要是由于該方法得到的外泌體純度不足,，產(chǎn)量較低，完整性欠佳且分離純化操作耗時(shí)長(zhǎng),。其他方法,，例如基于聚乙二醇（PEG）的沉淀，磷脂酰絲氨酸親和捕獲,，尺寸排阻色譜法和膜親和捕獲,，近年來已經(jīng)出現(xiàn)在特定的應(yīng)用中，但是只適用于特定場(chǎng)景,。近來,，非對(duì)稱流場(chǎng)-流分離方法已被用于從細(xì)胞和瘤子培養(yǎng)基中高分辨率地分選EV亞群，但其通量受到繁瑣的樣品制備程序的影響,。單一分析耗時(shí)的過程也限制了其普遍的應(yīng)用,。因此，目前亟需開發(fā)創(chuàng)新技術(shù)以提高外泌體分離純化的效率,，純度,，產(chǎn)量，速度和耐用性,?；诔瑸V的技術(shù)提供了潛在的有前途的替代方法，但它們也有缺點(diǎn),。在切向流過濾中,，使進(jìn)料流平行于多孔膜流動(dòng)，以避免堵塞,。然而,，盡管已實(shí)現(xiàn)使用切向流過濾從大量條件細(xì)胞培養(yǎng)基中濃縮外泌體，但受制于其一次性模塊的成本高,，高剪切應(yīng)力,，難以處理小體積樣品等因素而難以應(yīng)用于臨床分析。

外泌體生物學(xué)功能：1,、在心血管系統(tǒng)中,，據(jù)報(bào)道，源自人胚胎干細(xì)胞（ESC）的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷,；2,、在免疫系統(tǒng)中，據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制,；3,、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中，外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動(dòng)，從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理,；迄今為止,，尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細(xì)胞結(jié)合的途徑。然而,，比較明顯，其結(jié)合過程從外泌體識(shí)別受體細(xì)胞PM上的特定受體開始,。膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),，它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號(hào)通路的活躍，外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細(xì)胞中,。外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸,、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性,。

外泌體的提取分離方法：1、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡(jiǎn)單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費(fèi)時(shí),，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量。2,、密度梯度離心：在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時(shí)。外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體,。血漿外泌體質(zhì)譜

外泌體的提取的方式：過濾離心,。血漿血清提取試劑盒應(yīng)用

研究外泌體介導(dǎo)的microRNA的調(diào)控機(jī)制，第一步通過microRNA表達(dá)譜的檢測(cè)分析來源于肝病細(xì)胞的外泌體,。第二步,，應(yīng)用肝細(xì)胞和外泌體共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論：來源于肝病細(xì)胞的外泌體能促進(jìn)肝病細(xì)胞的生長(zhǎng)及遷移侵襲,，且外泌體有運(yùn)輸microRNA至受體細(xì)胞的功能。第三步,，研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個(gè)外泌體的重要調(diào)控因子,，與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，Vps4A基因的表達(dá)下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān),。通過microRNA高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA,，與肝病的發(fā)生密切相關(guān)。血漿血清提取試劑盒應(yīng)用

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