外泌體分離的主要挑戰(zhàn)之一是消除納米級(jí)污染物,，包括干擾外泌體標(biāo)志物解析的游離核酸和脂蛋白。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。盡管如此,，它仍難以符合臨床應(yīng)用所需的標(biāo)準(zhǔn),，主要是由于該方法得到的外泌體純度不足，產(chǎn)量較低,，完整性欠佳且分離純化操作耗時(shí)長(zhǎng),。其他方法，例如基于聚乙二醇（PEG）的沉淀,，磷脂酰絲氨酸親和捕獲，尺寸排阻色譜法和膜親和捕獲,，近年來(lái)已經(jīng)出現(xiàn)在特定的應(yīng)用中,，但是只適用于特定場(chǎng)景。近來(lái),，非對(duì)稱流場(chǎng)-流分離方法已被用于從細(xì)胞和瘤子培養(yǎng)基中高分辨率地分選EV亞群,，但其通量受到繁瑣的樣品制備程序的影響。單一分析耗時(shí)的過(guò)程也限制了其普遍的應(yīng)用,。因此,，目前亟需開(kāi)發(fā)創(chuàng)新技術(shù)以提高外泌體分離純化的效率，純度,，產(chǎn)量,，速度和耐用性,。基于超濾的技術(shù)提供了潛在的有前途的替代方法,，但它們也有缺點(diǎn),。在切向流過(guò)濾中，使進(jìn)料流平行于多孔膜流動(dòng),，以避免堵塞,。然而，盡管已實(shí)現(xiàn)使用切向流過(guò)濾從大量條件細(xì)胞培養(yǎng)基中濃縮外泌體,，但受制于其一次性模塊的成本高,，高剪切應(yīng)力，難以處理小體積樣品等因素而難以應(yīng)用于臨床分析,。外泌體存在于組織樣本中,，如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。組織外泌體融合實(shí)驗(yàn)

近年來(lái)，外泌體的捕獲技術(shù)越來(lái)越多,，微流體系也被用于外泌體提取,，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,，且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè),。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面，并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,，所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長(zhǎng)度。另外,，樣品量的注入速率比較低,，因此，對(duì)于大樣品量,，將需要較長(zhǎng)的處理時(shí)間,。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能。目前,，研究人員已經(jīng)開(kāi)發(fā)了多種方法來(lái)分離外泌體,，離心技術(shù)仍然是常用方法，其他方法,，例如過(guò)濾,、磁珠分離和色譜法等，也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),，但目前仍然沒(méi)有一種公認(rèn)有效的提取方法,，研究人員應(yīng)針對(duì)不同來(lái)源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案,。黑龍江外泌體攝取干細(xì)胞外泌體攝取流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法。

外泌體的提取,、純化和鑒定：每一個(gè)外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過(guò)形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的,。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長(zhǎng)與遷移,、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細(xì)胞或組織,，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用,。除了它們的診療潛力,，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報(bào)道,，并且通過(guò)生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成,。基于外泌體的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,。疾病的進(jìn)展和對(duì)診療的反應(yīng)也可以通過(guò)外泌體的多組分分析來(lái)確定,。一個(gè)推測(cè)的作用是外泌體可能從細(xì)胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。

外泌體遞送藥物的優(yōu)勢(shì)：許多新的候選藥物（例如蛋白質(zhì)和核酸）在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定,，對(duì)診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn),。鑒于與許多當(dāng)前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問(wèn)題，外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子,。由于外泌體體積小和其本身就是細(xì)胞產(chǎn)物，通過(guò)外泌體遞送藥物可以避免巨噬細(xì)胞的吞噬作用或降解,，還可以在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間循環(huán),，保持效果。其中,，外泌體能夠穿過(guò)血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經(jīng)系統(tǒng)是外泌體遞送藥物的一個(gè)明顯優(yōu)勢(shì),。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。需要開(kāi)發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術(shù)和策略,。唾液提取試劑盒應(yīng)用

外泌體鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物，多角度進(jìn)行鑒定,。組織外泌體融合實(shí)驗(yàn)

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評(píng)估外泌體形態(tài),、大小和表型的的兩種常見(jiàn)的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,，該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測(cè)電子類別,，在SEM中,，電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射，捕獲并檢測(cè)散射的電子,，從而生成粒子圖像,。但是，在TEM中,，不與粒子相互作用的電子穿過(guò)樣品,，并使用熒光屏進(jìn)行檢測(cè)。電子顯微鏡下外泌體大小不一,，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響,；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,，不適合進(jìn)行大量快速的測(cè)量；而且由于樣本經(jīng)過(guò)了干燥,、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過(guò)程,，對(duì)生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞，從而影響觀察的效果,，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量外泌體濃度,。組織外泌體融合實(shí)驗(yàn)

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