外泌體與免疫反應(yīng),、病毒致病性、妊娠,、心血管疾病,、中樞的神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病和病癥進展相關(guān)。由外泌體傳遞到受體細胞的蛋白質(zhì),、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應(yīng),。這種外泌體介導(dǎo)的反應(yīng)可以促進或阻止疾病。外泌體在調(diào)節(jié)復(fù)雜的細胞內(nèi)通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途,,包括神經(jīng)退行性疾病和病癥,。外泌體可被設(shè)計用于遞送不同的診療有效載荷,包括短干擾rna,、反義寡核苷酸,、化療藥物和免疫調(diào)節(jié)劑,并具有將其遞送到預(yù)期目標的能力,。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。唾液外泌體透射電鏡檢測
外泌體生物學功能:1,、在心血管系統(tǒng)中,據(jù)報道,,源自人胚胎干細胞(ESC)的間充質(zhì)干細胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷,;2、在免疫系統(tǒng)中,,據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉(zhuǎn)移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制,;3、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)中,,外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動,,從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機理;迄今為止,尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細胞結(jié)合的途徑,。然而,,比較明顯,其結(jié)合過程從外泌體識別受體細胞PM上的特定受體開始,。膜受體的識別是外泌體細胞反應(yīng)的基礎(chǔ),,它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細胞中,。細胞外囊泡與外泌體的區(qū)別外泌體的提取的方式:超速離心法。
近年來,,外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體,。采用這種方法獲得的樣品純度高,,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,,并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,所需的樣本量取決于流動通道的長度,。另外,樣品量的注入速率比較低,,因此,,對于大樣品量,將需要較長的處理時間,。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能,。目前,研究人員已經(jīng)開發(fā)了多種方法來分離外泌體,,離心技術(shù)仍然是常用方法,,其他方法,例如過濾,、磁珠分離和色譜法等,,也顯示出獨特的優(yōu)勢,但目前仍然沒有一種公認有效的提取方法,,研究人員應(yīng)針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案,。
被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉(zhuǎn)移準備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細胞重新定向,。外泌體的蛋白質(zhì)組學分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達譜,,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取,,進而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移,。進一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測肉瘤轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標,。利用外泌體自身的物理化學性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果,。
外泌體的提取分離方法:1、超濾離心:由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法,。2,、磁珠免疫法:外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),,用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,但是效率低,,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,難以普遍普及,。外泌體由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,,這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細胞。體液提取試劑盒價錢
外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,,是具有生物活性的脂雙層囊泡,。唾液外泌體透射電鏡檢測
透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,,在SEM中,電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,,捕獲并檢測散射的電子,,從而生成粒子圖像,。但是,在TEM中,,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,,并使用熒光屏進行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一,,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響,;另外樣品的準備階段比較復(fù)雜,,不適合進行大量快速的測量;而且由于樣本經(jīng)過了干燥,、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程,,對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞,從而影響觀察的效果,,無法準確測量外泌體濃度,。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以普遍普及。唾液外泌體透射電鏡檢測
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