為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀,？答：這種問題通常有三種可能性,，其一：使用的細(xì)胞上清或者血清量太低，從而造成了這樣的結(jié)果,。其二：使用了不透明的超速離心管,，一般來說外泌體產(chǎn)量都比較小，所以凡是不透明的管子,，基本都是比較難見到明顯沉淀的,，可以當(dāng)做有沉淀，然后操作下去即可,。其三：使用了角轉(zhuǎn),。部分品牌離心機(jī)的角轉(zhuǎn)管壁粘附性比較低，超離結(jié)束沒多久沉淀就會滑落下去,，所以請?jiān)陔x心結(jié)束時(shí)趕緊去收樣,。外泌體的角色：1、外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細(xì)胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用,，活躍細(xì)胞內(nèi)通路,。2、外泌體的角色之一：細(xì)胞-細(xì)胞通訊,，比如抗原遞呈,。超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法,。外泌體的標(biāo)記蛋白

外泌體的提取分離方法：1,、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑,。2、試劑盒提?。航鼛啄陙?，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。外泌體起源外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),。

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性,，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用,。除了它們的診療潛力,，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報(bào)道,，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成,。基于外泌體的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,。疾病的進(jìn)展和對診療的反應(yīng)也可以通過外泌體的多組分分析來確定的,。

胞外囊泡和外泌體的異質(zhì)性。細(xì)胞外囊泡的兩大類是胞外體和外泌體,。胞外體通過質(zhì)膜出芽釋放,，大小在50~1mm之間。外泌體起源于內(nèi)泌體途徑,，通過形成包含ILVs的ESEs,、LSEs，較終形成多泡體,。當(dāng)MVBs與質(zhì)膜融合時(shí),，外泌體釋放(尺寸范圍~40~160nm)。外泌體是一個(gè)高度異質(zhì)性的群體,，具有獨(dú)特的誘導(dǎo)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的能力,。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小,、含量(載物)、對受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來概念化,。這些特征的不同組合導(dǎo)致了外泌體的復(fù)雜異質(zhì)性,。外泌體存在于組織樣本中，如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等。

血漿中的外泌體蛋白既可以當(dāng)作標(biāo)志物,，也可以進(jìn)行機(jī)理研究,？首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個(gè)亞組：疾病進(jìn)展期和疾病慢性期,。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白組,，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進(jìn)展期CLL患者中明顯高表達(dá)，可以作為CLL進(jìn)展期診斷的輔助標(biāo)志物,。進(jìn)一步,，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期CLL患者外泌體中的高表達(dá)蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)，而NF-κB通路正是承接此效應(yīng)的關(guān)鍵通路,。通過從進(jìn)展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細(xì)胞中,，證實(shí)了S100-A9+外泌體能夠明顯促進(jìn)進(jìn)展期CLL患者PBMC細(xì)胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進(jìn)一步活躍NF-κB通路,。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進(jìn)展期CLL的標(biāo)志物,，并證實(shí)了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控，不斷活躍進(jìn)展期CLL患者自身PBMC細(xì)胞中的NF-κB通路,，促進(jìn)CLL進(jìn)展的特殊機(jī)理,。外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)。umibio

采用電子顯微鏡檢測外泌體時(shí)對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響,。外泌體的標(biāo)記蛋白

細(xì)胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用,，包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細(xì)胞的影響可能是通過不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來控制的,。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏,、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用。外泌體的內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號或融合,，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中,。外泌體的標(biāo)記蛋白

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