免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。首先對(duì)樣品進(jìn)行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性,，變性后,，通過(guò)SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對(duì)目的抗原的抗體中,?？贵w特異性識(shí)別膜表面上的抗原，然后將膜暴露于第二抗體中,。通過(guò)二抗的熒光標(biāo)簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶基團(tuán)進(jìn)行檢測(cè),。常用的標(biāo)記蛋白為CD63、CD81,、TSG101和ALIX等,。但是此方法的特異性和重復(fù)性會(huì)受到所用抗體質(zhì)量的限制。外泌體的直徑比微泡的要小,，后者直徑為100nm-1μm。外泌體的提取的方式：過(guò)濾離心,。胸水外泌體miRNA測(cè)序

全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的研究對(duì)象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA,，主要為mRNA和lncRNA、circRNA等非編碼RNA,。外泌體中攜帶有來(lái)自母本細(xì)胞的多種蛋白質(zhì),、脂類、短鏈RNA和長(zhǎng)鏈RNA等重要信息,。對(duì)外泌體中的長(zhǎng)鏈RNA進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析,，不只能夠篩選外泌體攜帶的特異Biomarker，同時(shí)對(duì)深入了解疾病或不同發(fā)育階段的內(nèi)在機(jī)制也有重要意義,。外泌體全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序體系,，充分結(jié)合了微量核酸建庫(kù)技術(shù)、NGS技術(shù)和全新的生物信息序列比對(duì)算法,，可實(shí)現(xiàn)對(duì)1mL血漿中的外泌體即可進(jìn)行mRNA,、lncRNA和circRNA等RNAs充分測(cè)序，獲取周全的外泌體轉(zhuǎn)錄組信息,。北京外泌體circRNA測(cè)序隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域,。

流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,，可用流式細(xì)胞儀檢測(cè)到陽(yáng)性表達(dá),，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體的定量。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)時(shí)需要單顆粒懸浮液,，當(dāng)外泌體濃度高或分離過(guò)程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒,，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。因此,，為了通過(guò)流式細(xì)胞儀觀察,，需要將外泌體通過(guò)免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細(xì)胞術(shù)之前,，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當(dāng)樣品通過(guò)流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號(hào),，不只可以對(duì)外泌體進(jìn)行高通量分析,，還可以基于抗原表達(dá)對(duì)外泌體進(jìn)行定量或分類。外泌體中常見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。

超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn)，主要是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù),、大小和形狀將其分離出來(lái),。首先4℃低速離心（300-500g，10min）去除死細(xì)胞以及細(xì)胞碎片,，隨后以較高離心速度(2000xg,，10min)去除生物聚合物以及凋亡小體，然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡,，結(jié)尾以超速離心沉淀外泌體,。通過(guò)懸浮以及重復(fù)超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白。超速離心法具有操作簡(jiǎn)單,、不易被分離試劑污染,、獲得的外泌體數(shù)量較多等優(yōu)點(diǎn)。但是此方法需要昂貴的超高速離心機(jī),，每次處理的樣本量較小,，費(fèi)時(shí)，電鏡鑒定時(shí)還發(fā)現(xiàn)外泌體易聚集成塊,，且上清中仍能檢測(cè)到大型囊泡,，純度不高，另外高速離心會(huì)損傷外泌體影響下游實(shí)驗(yàn)。外泌體通過(guò)內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞,。外泌體的提取的方式：密度梯度離心法。

ELISA與WB的原理一樣,，在抗體包被的微孔板中加入待測(cè)樣品,、封閉、一抗孵育,，洗滌后加入酶標(biāo)待測(cè)物形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，徹底洗滌后加顯色劑并用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值，結(jié)尾用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算外泌體表達(dá)量,。ELISA能實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體特異性蛋白的定量,。其他外泌體鑒定方法還有微流體測(cè)定法和外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)分析等。由于外泌體在各種生命過(guò)程中的重要作用及其作為疾病生物標(biāo)志物和藥物輸送系統(tǒng)的潛力,，人們對(duì)此領(lǐng)域的興趣越來(lái)越高,。盡管目前在技術(shù)上取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但尚未建立對(duì)外泌體進(jìn)行準(zhǔn)確和標(biāo)準(zhǔn)化鑒定以及定量的方法,，關(guān)于外泌體的量應(yīng)由囊泡顆粒的數(shù)量,、囊泡蛋白的量或囊泡數(shù)與蛋白之比來(lái)定義仍存在比較多爭(zhēng)論。建立外泌體分離,、表征以及效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問(wèn)題,。外泌體實(shí)際應(yīng)用之前，需要使用大型動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究和臨床試驗(yàn),。外周血提取試劑盒價(jià)錢

1983年,，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。胸水外泌體miRNA測(cè)序

當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來(lái)源,、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸,、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類型,，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化,、肉瘤侵襲等方方面面。有研究表明肉瘤來(lái)源的外泌體參與到肉瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,，促進(jìn)了肉瘤的生長(zhǎng)與侵襲。胸水外泌體miRNA測(cè)序

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