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外泌體分幾個(gè)型號(hào)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-30

密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,,目前普遍應(yīng)用的是蔗糖,,這種方法可以成功地將亞細(xì)胞成分(例如過(guò)氧化物酶體,線粒體和核內(nèi)體)分離到密度梯度溶液中的不同層中,。樣品被放置在梯度的頂部,,當(dāng)施加離心力時(shí),樣品中的顆粒以獨(dú)特的速率通過(guò)梯度,,該梯度以從上到下的密度增加,。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,隨后可以通過(guò)分餾收集,,密度梯度超速離心對(duì)從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效,。此方法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,、費(fèi)時(shí)且會(huì)造成外泌體損失,。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合,。外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,,剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,從而活躍細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,。外泌體分幾個(gè)型號(hào)

外泌體分幾個(gè)型號(hào),外泌體提取試劑盒

磁珠免疫法分離外泌體:將針對(duì)目的抗原的抗體通過(guò)生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,,然后將磁珠與樣品共孵育,使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物,,再用蒸餾水或者PBS沖洗,,結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體,。該方法相對(duì)于ELISA的好處主要是,珠粒提供了更大的表面積來(lái)捕獲外泌體,,從而提高了分離效率,。此外,使用磁珠時(shí),,樣品起始體積沒(méi)有上限,,而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL,且ELISA洗脫雜質(zhì)時(shí)容易造成孔間交叉污染,。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時(shí),,磁珠法可分離出更純凈的外泌體,特異性高,、速度更快,,并且不需要昂貴的儀器。另外,,與其他分離方法相比,,磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時(shí),,外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響,。重慶外泌體從研究上來(lái)講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。

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質(zhì)膜的連續(xù)內(nèi)陷較終導(dǎo)致多泡體的形成,,多泡體可與細(xì)胞內(nèi)的其他囊泡和細(xì)胞器交叉,從而增加了外泌體成分的多樣性,。根據(jù)細(xì)胞來(lái)源的不同,,細(xì)胞外囊泡,包括外泌體,,可以包含細(xì)胞的許多成分,,包括DNA、RNA,、脂質(zhì),、代謝物、胞質(zhì)和細(xì)胞表面蛋白,。目前產(chǎn)生外泌體的生理目的尚不清楚,,需要進(jìn)一步研究。一個(gè)推測(cè)的作用是外泌體可能從細(xì)胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,。近來(lái)的研究也表明外泌體中特定細(xì)胞成分的功能,、靶向、機(jī)制驅(qū)動(dòng)的積累,,提示它們?cè)谡{(diào)節(jié)細(xì)胞間通訊中發(fā)揮作用,。

細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來(lái)完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,,包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細(xì)胞分泌,,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì)、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來(lái)源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子。近年來(lái),,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲(chóng)領(lǐng)域,;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體,。

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外泌體的提取分離的方法:1、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,,采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行,可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡(jiǎn)單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),,純度也受到質(zhì)疑;此外,,重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量。2,、密度梯度離心:在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法,。通過(guò)密度梯度離心,,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,,耗時(shí),。外泌體鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定,。研究所外泌體提取試劑盒產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)

外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成,。外泌體分幾個(gè)型號(hào)

外泌體提取在短時(shí)間(一周之內(nèi))使用,可以放在4度保存,,如果長(zhǎng)時(shí)間保存可以放在-20度或-80度保存,。也可以將外泌體進(jìn)行分裝,分別放在-20度或-80度,。外泌體檢測(cè)方法:外泌體分離之后,,需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,,多角度進(jìn)行鑒定,。l、透射電鏡鑒定法:簡(jiǎn)稱TEM,,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。2,、納米顆粒追蹤分析法:簡(jiǎn)稱NTA,,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快,,檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。外泌體分幾個(gè)型號(hào)

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