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黑龍江外泌體脂質(zhì)組學(xué)

來源: 發(fā)布時間:2023-03-30

外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合,,有文獻(xiàn)報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,,RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?,F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1,、2,、4,、5、6,、7、11等),。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)),、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33(結(jié)腸上皮細(xì)胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來源),、CD86(抗原提呈細(xì)胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細(xì)胞),。外泌體發(fā)揮功能:將細(xì)胞或組織中多余的或者有害的分子排除,這為研究生物標(biāo)志物提供了可能,。外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用,,活躍細(xì)胞內(nèi)通路,。黑龍江外泌體脂質(zhì)組學(xué)

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透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態(tài),、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,,在SEM中,,電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,捕獲并檢測散射的電子,,從而生成粒子圖像,。但是,在TEM中,,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,,并使用熒光屏進(jìn)行檢測,。電子顯微鏡下外泌體大小不一,,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,,外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響;另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,,不適合進(jìn)行大量快速的測量,;而且由于樣本經(jīng)過了干燥,、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程,,對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞,從而影響觀察的效果,,無法準(zhǔn)確測量外泌體濃度,。上海外泌體測序免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。

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細(xì)胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細(xì)胞,、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用,,包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞,。診療性外泌體對靶細(xì)胞的影響可能是通過不同的進(jìn)入或相互作用機制來控制的,。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹,、脂筏,、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號或融合,,從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中,。近年來,,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域,。

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),,現(xiàn)今,,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,,參與細(xì)胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。外泌體研究使用血漿樣本進(jìn)行實驗較好,。

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外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心,,這種操作簡單,、省時,,不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,,耗時,量少,。外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中,。外泌體分泌過程

近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域,。黑龍江外泌體脂質(zhì)組學(xué)

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子,、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),,在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移,、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,,使得它具有潛在的應(yīng)用價值,,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),,另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療,。外泌體研究,應(yīng)選用血漿還是血清,?答:血清是血液凝固之后收集的液體,所以其中少了纖維蛋白原,,凝血因子,以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,,具有凝血功能,。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,,有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌,。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合,。黑龍江外泌體脂質(zhì)組學(xué)

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