外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,，其大小均一,，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞和肉瘤細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,，可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動等,。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體作為核酸的藥物遞送載體,。江蘇外泌體circRNA測序

超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn),，主要是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù),、大小和形狀將其分離出來。首先4℃低速離心（300-500g,，10min）去除死細(xì)胞以及細(xì)胞碎片，隨后以較高離心速度(2000xg,，10min)去除生物聚合物以及凋亡小體,，然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡，結(jié)尾以超速離心沉淀外泌體,。通過懸浮以及重復(fù)超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白,。超速離心法具有操作簡單、不易被分離試劑污染,、獲得的外泌體數(shù)量較多等優(yōu)點,。但是此方法需要昂貴的超高速離心機，每次處理的樣本量較小,，費時，電鏡鑒定時還發(fā)現(xiàn)外泌體易聚集成塊,，且上清中仍能檢測到大型囊泡,，純度不高,，另外高速離心會損傷外泌體影響下游實驗,。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運至靶細(xì)胞,。中科華瑞外泌體外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而活躍細(xì)胞內(nèi)的信號通路,。

外泌體的提取分離方法：1,、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心、高速離心交替進行,，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量,。2、密度梯度離心：在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣，耗時,。

胞外囊泡和外泌體的異質(zhì)性。細(xì)胞外囊泡的兩大類是胞外體和外泌體,。胞外體通過質(zhì)膜出芽釋放，大小在50~1mm之間,。外泌體起源于內(nèi)泌體途徑，通過形成包含ILVs的ESEs,、LSEs，較終形成多泡體,。當(dāng)MVBs與質(zhì)膜融合時，外泌體釋放(尺寸范圍~40~160nm),。外泌體是一個高度異質(zhì)性的群體，具有獨特的誘導(dǎo)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的能力,。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物),、對受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來概念化,。這些特征的不同組合導(dǎo)致了外泌體的復(fù)雜異質(zhì)性,。外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織,、細(xì)胞間隙,、體液中。

外泌體的提取,、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué),、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實現(xiàn)的,。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，能比較好的保護其包被的物質(zhì),，且能靶向特定細(xì)胞或組織,，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合,。杭州外泌體測序

一個推測的作用是外泌體可能從細(xì)胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,。江蘇外泌體circRNA測序

外泌體的相關(guān)成分：1,、外泌體的膜同細(xì)胞一樣，是磷脂雙分子層,。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,，能綁定特異性的肽鏈,。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins,、RAN,、GTPases,。5,、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide,、SM,、PC,，限制膜流動,，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6、外泌體中含有核酸,，包括miRNA,、DNA、lncRNA,、mRNA,；同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中,。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6、PLD2,、RAB家族,。8、一些物質(zhì)進行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU）,，進行主動包埋,。江蘇外泌體circRNA測序

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