NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過樣本,，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時(shí)會發(fā)生散射,，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運(yùn)動(dòng),，實(shí)現(xiàn)顆粒可視化,。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體,，因此無法排除其他物質(zhì)干擾。外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,，從而活躍細(xì)胞內(nèi)的信號通路,。細(xì)菌外泌體提取試劑盒服務(wù)

外泌體的相關(guān)成分：1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,，是磷脂雙分子層,。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,，能綁定特異性的肽鏈,。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins,、RAN、GTPases,。5,、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide,、SM,、PC，限制膜流動(dòng),，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6,、外泌體中含有核酸，包括miRNA,、DNA,、lncRNA、mRNA,；同時(shí)還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral,、ARF6、PLD2,、RAB家族,。8、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU），進(jìn)行主動(dòng)包埋,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。腦脊液外泌體融合實(shí)驗(yàn)外泌體存在于組織樣本中，如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等。

細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體,、微泡和凋亡小體。其中,，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細(xì)胞分泌，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì),、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,，主要由微囊泡,、凋亡小體、外泌體組成,。而外泌體是其中一類小囊泡,，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml,，可攜帶核酸,、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,，存在于血液,、唾液、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實(shí),，外泌體可以通過細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸,、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì),，發(fā)揮特殊的功能,。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、腫細(xì)胞細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展,、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價(jià)和預(yù)后分析,。外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）,、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1,、免疫磁珠法,，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高,、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn),。2、PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合,，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整,，純度較高。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性,，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。3,、色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不普遍,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體,。外泌體的提取分離方法：PEG-base沉淀法。杭州CD81外泌體慢病毒

外泌體在免疫調(diào)控,、肉瘤轉(zhuǎn)移和血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域發(fā)揮著非常重要的作用,。細(xì)菌外泌體提取試劑盒服務(wù)

超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn)，主要是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù),、大小和形狀將其分離出來,。首先4℃低速離心（300-500g，10min）去除死細(xì)胞以及細(xì)胞碎片,，隨后以較高離心速度(2000xg,，10min)去除生物聚合物以及凋亡小體，然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡,，結(jié)尾以超速離心沉淀外泌體,。通過懸浮以及重復(fù)超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白。超速離心法具有操作簡單,、不易被分離試劑污染,、獲得的外泌體數(shù)量較多等優(yōu)點(diǎn)。但是此方法需要昂貴的超高速離心機(jī),，每次處理的樣本量較小,，費(fèi)時(shí)，電鏡鑒定時(shí)還發(fā)現(xiàn)外泌體易聚集成塊,，且上清中仍能檢測到大型囊泡,，純度不高，另外高速離心會損傷外泌體影響下游實(shí)驗(yàn),。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。細(xì)菌外泌體提取試劑盒服務(wù)

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