外泌體研究背景：胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,，主要由微囊泡,、凋亡小體、外泌體組成,。而外泌體是其中一類(lèi)小囊泡,，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml,，可攜帶核酸,、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等，存在于血液,、唾液,、尿液等多種體液中。越來(lái)越多的研究證實(shí),，外泌體可以通過(guò)細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸,、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì),，發(fā)揮特殊的功能,。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、肉瘤細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展,、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用,。對(duì)外泌體的分析和檢測(cè)可以輔助疾病的早期診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后分析,。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,，包括血液、唾液,、尿液,、乳汁等。研究所提取試劑盒服務(wù)

外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體,，是具有生物活性的脂雙層囊泡,，大小約為30-100nm,，由不同類(lèi)型的正常細(xì)胞和瘤子細(xì)胞自然產(chǎn)生和釋放。這些囊泡在細(xì)胞間通訊中起重要作用,，并影響細(xì)胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng),。外泌體通過(guò)內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞,。外泌體貨物的組成非常多樣化,，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子,、細(xì)胞因子,、細(xì)胞受體、脂質(zhì)以及不同的核酸,，例如miRNA和環(huán)狀RNA,。外泌體獲取外泌體作為核酸的藥物遞送載體。

Exosome,，中文名外泌體,，是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn)，但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物,。然而較近幾年,，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸,，能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣。2015年,，隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出,，越來(lái)越多的人開(kāi)始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療。外泌體作為一個(gè)新型的研究熱點(diǎn),，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,，已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式，在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景,。

免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。首先對(duì)樣品進(jìn)行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性,，變性后,，通過(guò)SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對(duì)目的抗原的抗體中,?？贵w特異性識(shí)別膜表面上的抗原,，然后將膜暴露于第二抗體中。通過(guò)二抗的熒光標(biāo)簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶基團(tuán)進(jìn)行檢測(cè),。常用的標(biāo)記蛋白為CD63,、CD81、TSG101和ALIX等,。但是此方法的特異性和重復(fù)性會(huì)受到所用抗體質(zhì)量的限制,。外泌體的直徑比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm,。超離法是較常用的外泌體純化手段,。

磁珠免疫法分離外泌體：將針對(duì)目的抗原的抗體通過(guò)生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育,，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物,，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體,。該方法相對(duì)于ELISA的好處主要是,，珠粒提供了更大的表面積來(lái)捕獲外泌體,，從而提高了分離效率,。此外，使用磁珠時(shí),，樣品起始體積沒(méi)有上限,，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL，且ELISA洗脫雜質(zhì)時(shí)容易造成孔間交叉污染,。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時(shí),，磁珠法可分離出更純凈的外泌體，特異性高,、速度更快,，并且不需要昂貴的儀器。另外,，與其他分離方法相比,，磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時(shí),，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響,。外泌體作為小分子的藥物傳遞載體。細(xì)胞上清提取試劑盒分類(lèi)

外泌體具有異質(zhì)性,，即使是同一種細(xì)胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別,。研究所提取試劑盒服務(wù)

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心,，這種操作簡(jiǎn)單,、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性,，但同樣存在純度不足的問(wèn)題,。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高,，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,，耗時(shí)，量少,。研究所提取試劑盒服務(wù)

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