研究外泌體介導(dǎo)的microRNA的調(diào)控機(jī)制,，第一步通過(guò)microRNA表達(dá)譜的檢測(cè)分析來(lái)源于肝病細(xì)胞的外泌體。第二步,，應(yīng)用肝細(xì)胞和外泌體共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論：來(lái)源于肝病細(xì)胞的外泌體能促進(jìn)肝病細(xì)胞的生長(zhǎng)及遷移侵襲,，且外泌體有運(yùn)輸microRNA至受體細(xì)胞的功能。第三步,，研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個(gè)外泌體的重要調(diào)控因子,，與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，Vps4A基因的表達(dá)下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān),。通過(guò)microRNA高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA,，與肝病的發(fā)生密切相關(guān)。近年來(lái),，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲(chóng)領(lǐng)域。海洋生物外泌體芯片

外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡,，其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,，包括血液,、唾液、尿液,、乳汁等,，同時(shí)也存在于組織樣本中，如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,，但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性,，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,，調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng),。同時(shí)，外泌體具有抗原提呈,、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用,；此外,，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來(lái)進(jìn)行藥物遞送。上海CD81外泌體慢病毒包裝多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡,。1983年,，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型均可分泌外泌體,，且外泌體天然存在于體液中,，包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊,，對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),，無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā)。

眾所周知外泌體是供體細(xì)胞分泌出來(lái)的胞外囊泡,，被受體細(xì)胞吸收后起到調(diào)控受體細(xì)胞功能,，這篇綜述文章主要討論了外泌體的生成、生化性質(zhì)以及作為藥物遞送載體的潛力,。外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞、肉瘤的生長(zhǎng)與遷移,、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不同的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細(xì)胞或組織,，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。外泌體發(fā)揮功能：將細(xì)胞或組織中多余的或者有害的分子排除,，這為研究生物標(biāo)志物提供了可能,。

磁珠免疫法分離外泌體：將針對(duì)目的抗原的抗體通過(guò)生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育,，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物,，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體,。該方法相對(duì)于ELISA的好處主要是,，珠粒提供了更大的表面積來(lái)捕獲外泌體，從而提高了分離效率,。此外,，使用磁珠時(shí)，樣品起始體積沒(méi)有上限,，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL,，且ELISA洗脫雜質(zhì)時(shí)容易造成孔間交叉污染,。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時(shí)，磁珠法可分離出更純凈的外泌體,，特異性高,、速度更快，并且不需要昂貴的儀器,。另外,，與其他分離方法相比，磁珠法不影響外泌體形態(tài),。但是采用磁珠法時(shí),，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸,、脂類(lèi)等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。干細(xì)胞外泌體提取試劑盒公司

免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合,。海洋生物外泌體芯片

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評(píng)估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見(jiàn)的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測(cè)電子類(lèi)別,，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,，捕獲并檢測(cè)散射的電子,，從而生成粒子圖像。但是,，在TEM中,，不與粒子相互作用的電子穿過(guò)樣品，并使用熒光屏進(jìn)行檢測(cè),。電子顯微鏡下外泌體大小不一,，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高,，外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響,；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜，不適合進(jìn)行大量快速的測(cè)量,；而且由于樣本經(jīng)過(guò)了干燥,、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過(guò)程，對(duì)生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞,，從而影響觀察的效果,，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量外泌體濃度,。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體，生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實(shí)驗(yàn),，難以普遍普及。海洋生物外泌體芯片

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