外泌體是包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30–150nm),由所有體外和體內(nèi)細(xì)胞持續(xù)分泌,。由于人體內(nèi)復(fù)雜的功能,,包括細(xì)胞間通訊和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),外泌體正在改變研究,。這些細(xì)胞外囊泡正在生長,,這既是為了了解其生物學(xué)功能,也是為了將其用于實(shí)際應(yīng)用,,如無創(chuàng)診斷和高級(jí)調(diào)理開發(fā),。Dynabeads提供一系列外泌體分離產(chǎn)品和工具,用于表征和分析其RNA和蛋白質(zhì)含量,以及體外和體內(nèi)追蹤,,以幫助您進(jìn)一步了解這些迷人的外泌體,。超速離心方案可能冗長乏味且耗時(shí)的,。您可使用靈活且可擴(kuò)展的總外泌體分離試劑從細(xì)胞培養(yǎng)基或任何體液中即刻分離完整的外泌體,。這些試劑及其隨附的方案是多種試驗(yàn)的理想選擇,,包括處理少量樣本和處理多個(gè)樣本。外泌體的直徑比微泡的要小,,后者直徑為100nm-1μm,。唾液提取試劑盒價(jià)錢
磁珠免疫法分離外泌體:將針對(duì)目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,然后將磁珠與樣品共孵育,,使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物,再用蒸餾水或者PBS沖洗,,結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體,。該方法相對(duì)于ELISA的好處主要是,珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體,從而提高了分離效率,。此外,,使用磁珠時(shí),,樣品起始體積沒有上限,,而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL,,且ELISA洗脫雜質(zhì)時(shí)容易造成孔間交叉污染。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時(shí),,磁珠法可分離出更純凈的外泌體,,特異性高,、速度更快,,并且不需要昂貴的儀器,。另外,,與其他分離方法相比,磁珠法不影響外泌體形態(tài),。但是采用磁珠法時(shí),,外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。體液外泌體Dil一個(gè)推測(cè)的作用是外泌體可能從細(xì)胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,。
外泌體研究背景:胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,,主要由微囊泡、凋亡小體,、外泌體組成,。而外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,,密度1.10~1.18g/ml,,可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,,存在于血液,、唾液、尿液等多種體液中,。越來越多的研究證實(shí),,外泌體可以通過細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì),、脂質(zhì)等特定物質(zhì),,發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中,、腫細(xì)胞細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展,、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。對(duì)外泌體的分析和檢測(cè)可以輔助疾病的早期診斷,、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后分析,。
密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,,目前普遍應(yīng)用的是蔗糖,,這種方法可以成功地將亞細(xì)胞成分(例如過氧化物酶體,線粒體和核內(nèi)體)分離到密度梯度溶液中的不同層中,。樣品被放置在梯度的頂部,,當(dāng)施加離心力時(shí),樣品中的顆粒以獨(dú)特的速率通過梯度,,該梯度以從上到下的密度增加,。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,隨后可以通過分餾收集,,密度梯度超速離心對(duì)從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效,。此方法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣、費(fèi)時(shí)且會(huì)造成外泌體損失,。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一,,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。外泌體中含有核酸,,包括miRNA,、DNA、lncRNA,、mRNA,。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,,這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心,,這種操作簡單、省時(shí),,不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),,量少,。外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體,因此無法排除其他物質(zhì)干擾,。外泌體的標(biāo)志蛋白
超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法,。唾液提取試劑盒價(jià)錢
外泌體病毒傳染:外泌體可以限制或促進(jìn)病毒傳染,。如IFNα或APOBEC3G等外泌體載體可通過限制病毒復(fù)制或增強(qiáng)抗病毒免疫來阻止傳染。病毒也可以劫持外泌體的生物發(fā)生機(jī)制來促進(jìn)病毒的傳播,。外泌體可以作為一個(gè)假包膜,,通過四聚體蛋白(CD81,CD9)和PtSer相互作用增強(qiáng)病毒進(jìn)入受體細(xì)胞,并幫助逃避抗病毒免疫,。病毒組分(蛋白質(zhì)和miRNA)的共轉(zhuǎn)運(yùn)也可能增強(qiáng)傳染性,。外泌體介導(dǎo)的病毒轉(zhuǎn)移可能參與了病毒的遺傳協(xié)同和多重傳染.(CMV,巨細(xì)胞病毒,;HSV-1,1型皰疹病毒)。唾液提取試劑盒價(jià)錢
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