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來源: 發(fā)布時間:2023-04-20

透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態(tài),、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,,在SEM中,,電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,捕獲并檢測散射的電子,,從而生成粒子圖像,。但是,,在TEM中,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,,并使用熒光屏進行檢測,。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,,外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響;另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,,不適合進行大量快速的測量,;而且由于樣本經(jīng)過了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程,,對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞,,從而影響觀察的效果,無法準(zhǔn)確測量外泌體濃度,。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,,生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,,難以普遍普及,。外泌體由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細胞,。湖南鼻腔灌洗液外泌體

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被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為腫細胞的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境,。用肺轉(zhuǎn)傾向的腫細胞細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的腫細胞細胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的腫細胞細胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達譜,,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),,而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取,,進而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移,。進一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測腫細胞轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo),。外泌體的提取的方式:PS親和法,。外泌體產(chǎn)生相關(guān)分子1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn),。

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質(zhì)膜的連續(xù)內(nèi)陷較終導(dǎo)致多泡體的形成,,多泡體可與細胞內(nèi)的其他囊泡和細胞器交叉,從而增加了外泌體成分的多樣性,。根據(jù)細胞來源的不同,,細胞外囊泡,包括外泌體,,可以包含細胞的許多成分,,包括DNA,、RNA、脂質(zhì),、代謝物,、胞質(zhì)和細胞表面蛋白。目前產(chǎn)生外泌體的生理目的尚不清楚,,需要進一步研究,。一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。較近的研究也表明外泌體中特定細胞成分的功能,、靶向,、機制驅(qū)動的積累,提示它們在調(diào)節(jié)細胞間通訊中發(fā)揮作用,。

細胞外小泡通過充當(dāng)脂肪組織,、肝臟、骨骼肌和免疫細胞之間的細胞間通訊方式,,在肥胖及其代謝并發(fā)癥的發(fā)展中發(fā)揮作用,。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調(diào)節(jié)中起作用,外周胰島素敏感性是T2D發(fā)病機理的主要組成部分,。外泌體似乎通過至少兩種不同的機制來調(diào)節(jié)胰島素敏感性,,即通過調(diào)節(jié)炎癥或通過與胰島素反應(yīng)性部位的直接相互作用。后者可通過與主要胰島素信號分子(例如磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信號通路)相互作用而影響胰島素信號通路而直接或間接發(fā)生,。與對照組相比,,糖尿病患者的血漿EV含量更高,并且與對照組相比,,糖尿病小鼠的血漿外泌體數(shù)量也更高,。然而,,確定外泌體的作用及其在肝/腸軸通訊中的潛在作用將需要對它們的組成有更好的了解,,特別是飲食是否會改變腸源性外泌體的含量,因此就胰島素反應(yīng)而言它們的生物學(xué)功能尚未研究,。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,,外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響。

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AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器,,將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi),,根據(jù)稱重精確測量流體體積,可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量,。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨中心孔中并送至廢液桶,,避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間,,當(dāng)達到設(shè)定的提取體積后,,轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個微量離心管繼續(xù)收集,,到收集完成后自動停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴增效率,,而且由于采用微滴計數(shù)的方法進行定量,,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,對所測樣品中的核酸分子進行一定定量,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。外泌體霧化價格多少錢

流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,,其用于外泌體定量檢測的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。湖南鼻腔灌洗液外泌體

外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡,其大小為30-150nm,,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),,參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。所有的細胞都能分泌外泌體,但是不同細胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性,,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣,。外泌體普遍參與細胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞,調(diào)控細胞生理活動,。同時,,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細胞轉(zhuǎn)化,、促進瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用;此外,,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送,。湖南鼻腔灌洗液外泌體

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