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外泌體圖片

來源: 發(fā)布時間:2023-04-24

外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心,,這種操作簡單、省時,,不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時,,量少,。膜受體的識別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍,。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷,、療效評價和預(yù)后分析。外泌體圖片

外泌體圖片,外泌體提取試劑盒

超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn),主要是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù),、大小和形狀將其分離出來,。首先4℃低速離心(300-500g,10min)去除死細(xì)胞以及細(xì)胞碎片,,隨后以較高離心速度(2000xg,,10min)去除生物聚合物以及凋亡小體,然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡,,結(jié)尾以超速離心沉淀外泌體,。通過懸浮以及重復(fù)超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白。超速離心法具有操作簡單,、不易被分離試劑污染,、獲得的外泌體數(shù)量較多等優(yōu)點。但是此方法需要昂貴的超高速離心機(jī),,每次處理的樣本量較小,,費時,電鏡鑒定時還發(fā)現(xiàn)外泌體易聚集成塊,,且上清中仍能檢測到大型囊泡,,純度不高,另外高速離心會損傷外泌體影響下游實驗,。江西外泌體芯片外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即:對各種外泌體的分類,。

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外泌體研究可以指導(dǎo)診治肝損傷、酒精或非酒精性脂肪肝等其他肝臟疾病,。藥物誘導(dǎo)肝損傷(DILI)大鼠模型中,,尿外泌體中的蛋白含量減少,包括CD26,、CD81和其他潛在的標(biāo)志物蛋白,。而另一項研究則發(fā)現(xiàn)DILI大鼠血清中分離到的外泌體含有更高水平的蛋白,如HSP70,、HSP90等,。MSCs來源的外泌體可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá),減弱CCL4誘導(dǎo)的肝損傷,。而酒精刺激會促進(jìn)外泌體的分泌,,miRNAs水平也會升高,并促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌,,喚醒單核細(xì)胞的分化,。盡管已取得上述成果,我們對外泌體的研究尚不夠深入,,外泌體在肝臟生理和病理中的重要作用及其臨床應(yīng)用仍有待繼續(xù)探索,。

外泌體(Exosome)介導(dǎo)瘤血管的形成和轉(zhuǎn)移,。外泌體(Exosome)能將自身的細(xì)胞因子IL-8和VEGF釋放到細(xì)胞外,作用于內(nèi)皮細(xì)胞膜表面受體,,導(dǎo)致瘤血管快速形成并較終通過發(fā)生EMT過程促進(jìn)瘤的遷移,。瘤細(xì)胞來源的外泌體(Exosome)中含有血管生長素、血管內(nèi)皮生長因子等,,這些細(xì)胞因子以不同的作用方式促進(jìn)瘤血管的形成,,如VEGF通過喚醒磷酸酯酶C和第二信使的形成,誘導(dǎo)纖維蛋白溶解酶原活化物的表達(dá),,使得基底膜降解,,從而促進(jìn)瘤細(xì)胞的遷移。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。

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目前,在各種健康與疾病模型中都發(fā)現(xiàn),,外泌體通過分子信息傳遞扮演著重要的角色,。外泌體還越來越多地被認(rèn)為是疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后因子,具有重要的臨床診斷和治理意義,。除此之外,,它們還有潛力被用于臨床,作為基因和藥物遞送的載體,。健康人和多種疾病的患者會將含有不同RNA和蛋白質(zhì)成分的外泌體釋放到體液循環(huán)中,,因其特殊性,外泌體可以作為生物標(biāo)志物來對疾病進(jìn)行檢測,。例如,,從血液或尿液中分離的外泌體可以用作病癥、心臟病的診斷和預(yù)后的指標(biāo),。PS親和法提取的外泌體,,其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上。腦脊液外泌體提取

外泌體的復(fù)雜性,,為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標(biāo)的診斷窗口,。外泌體圖片

所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,包括血液,、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究,。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,,對外泌體的研究興趣日益增長,,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂,。研究發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌的exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲,,并且其攜帶的mRNA成分可以進(jìn)入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì),不只是mRNA,,exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性,,在進(jìn)入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平。外泌體圖片

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